[发明专利]一种用于精确检测病毒的探针载体及其制备方法以及应用

说明书

本发明公开了一种用于精确检测病毒的探针载体的应用，包括以下步骤：将氮化硼纳米管分散在去离子水中，加入核酸引物，制得引物‑纳米材料分散液，然后加入聚乙二醇二丙烯酸酯溶液、聚乙二醇溶液、紫外光引发剂溶液，制得第一预聚物溶液；将核酸探针加入到氧化石墨烯/碳纳米管复合颗粒的分散液中，然后加入聚乙二醇二丙烯酸酯溶液、聚乙二醇溶液、紫外光引发剂溶液，混合均匀后加入丙烯酸修饰的核酸引物溶液，制得第二预聚物溶液；将第一预聚物溶液滴加到PDMS基底上，进行光交联，然后滴加第二预聚物溶液进行光交联反应，制得用于RT‑QPCR的双层特异性微粒。本发明制得的探针载体用于检测病毒颗粒时灵敏度高，特异性好。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于精确检测病毒的探针载体及其制备方法以及应用。

背景技术

病毒是造成全球范围内疾病发病率和死亡率居高不下的最主要的病原体,由于病毒的大小在纳米级,不便直接观察到其形状以及研究它们的结构。同时,病毒的结构相当简单,通常只有蛋白质衣壳及核酸内核,这种结构使病毒能随着环境变化通过基因替换或基因重组等方式发生快速的突变和进化,从而逃避免疫监测或免疫抑制,增大病愈难度。因此,发展快速、高效的病毒检测方法至关重要。目前，逆转录定量聚合酶链反应广泛用于与检测病毒，目前该检测技术的关键在于建立目标特异性颗粒。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种用于精确检测病毒的探针载体及其制备方法及其应用，本发明提供的材料用于病毒检测时灵敏度高，稳定性好。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

一种用于精确检测病毒的探针载体的应用，包括以下步骤：

(1)将氮化硼纳米管分散在去离子水中，然后加入核酸引物，冰水浴条件下超声处理，制得引物-纳米材料分散液；将核酸探针加入到氧化石墨烯/碳纳米管复合颗粒的分散液中，冰水浴下超声处理，制得探针-纳米复合材料分散液；

(2)将聚乙二醇二丙烯酸酯溶液、聚乙二醇溶液、紫外光引发剂溶液和探针-纳米复合材料分散液以等体积混合均匀制得第一预聚物溶液；将聚乙二醇二丙烯酸酯溶液、聚乙二醇溶液、紫外光引发剂溶液和引物-纳米材料分散液以等体积混合均匀制得混合液，然后加入混合液体积1/9的丙烯酸修饰的核酸引物溶液，制得第二预聚物溶液；将第一预聚物溶液滴加到干净的PDMS基底上，进行光交联，然后在已固化的凝胶上滴加第二预聚物溶液进行光交联反应，制得用于RT-QPCR的双层特异性微粒。

作为上述技术方案的优选，步骤(1)中，所述氮化硼纳米管、核酸引物的用量比为1μg：1pmol，核酸探针、氧化石墨烯/碳纳米管复合颗粒的用量比为1pmol：1μg。

作为上述技术方案的优选，步骤(1)中，所述超声处理的功率为100-200W，时间为30min。

作为上述技术方案的优选，步骤(2)中，所述聚乙二醇二丙烯酸酯溶液的质量浓度为20％，聚乙二醇溶液为质量浓度为20％的聚乙二醇700溶液，所述紫外光引发剂溶液为质量浓度为5％的Darocur 1173溶液。

作为上述技术方案的优选，步骤(2)中，所述光交联时的紫外线的光强度为0.3mW/cm²，交联时间为30s。

作为上述技术方案的优选，步骤(2)中，第一预聚物溶液、第二预聚物溶液的体积比为1：(2.5-3)。

作为上述技术方案的优选，步骤(1)中，所述碳纳米管的直径为5-10nm；所述氧化石墨烯和碳纳米管的质量比为(1-2)：1。

作为上述技术方案的优选，所述载体为氧化石墨烯与碳纳米管复合形成的纳米颗粒。

进一步的，一种用于精确检测病毒的探针载体的制备方法，包括以下步骤：将氧化石墨烯溶液碳纳米管混合，超声处理，之后过滤，将固体洗涤后干燥即得。