[发明专利]一种PD-1生物制剂的抗体检测试剂盒及制备方法

说明书

本发明公开了一种PD‑1生物制剂的抗体检测试剂盒及制备方法，涉及抗体检测技术领域。试剂盒包括抗体捕获器件和抗体检测器件，抗体捕获器件包括包被有PD‑1生物制剂的固相载体，抗体检测器件为固定功能性片段的纤维素膜或偶联了功能性片段的结合物；功能性片段为PD‑1生物制剂的可变区、重链可变区或互补决定区。本发明提供的检测试剂盒具有捕获效率高、准确率高、灵敏度高的优势，可以有效避免假阳性和假阴性的发生，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及抗体检测技术领域，具体而言，涉及一种PD-1生物制剂的抗体检测试剂盒及制备方法。

背景技术

PD-1（程序性死亡受体1），是一种重要的免疫抑制分子，为免疫球蛋白超家族，是一个288氨基酸残基的膜蛋白。以PD-1为靶点的免疫调节对抗肿瘤、抗感染、抗自身免疫性疾病及器官移植存活等均有重要的意义。

以PD-1为靶点而设计的单抗药物包括信迪利单抗（Sintilimab）、纳武单抗（Nivolumab）、替雷利珠单抗（Tislelizumab）、帕博利珠单抗（Pembrolizumab）、卡瑞利珠单抗（Camrelizumab）、阿维鲁单抗(Avelumab)、阿特珠单抗(Atezolizumab)和特瑞普利单抗（Toripalimab）被FDA批准用于治疗转移性黑色素瘤、晚期（转移性）非小细胞肺癌、复发或难治性经典型霍奇金淋巴瘤和局部晚期或转移性尿路上皮癌、晚期非鳞状非小细胞肺癌等疾病。

尽管临床实践证明此类生物制剂在治疗上述疾病时获得良好的疗效，但不是所有的患者均有效，有些患者一开始就无效（原发性无效），更多的患者表现为开始时有效，但在使用多次后产生耐药而无效（继发无效）。进一步的研发发现，继发无效者跟体内产生抗生物制剂药物的抗体有关，因此，检测血液中抗生物制剂的抗体是一项重要的伴随诊断。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种PD-1生物制剂的抗体检测试剂盒及制备方法以解决上述技术问题。

现有的抗PD-1的抗体检测方法存在假阳性和假阴性的问题。经发明人研究发现，假阴性的问题根源在于：双抗原夹心方法在捕获样本中的抗PD-1的抗体后，存在与后续的检测抗体元件结合效率的问题，导致本来是阳性样本而无法检测出，导致假阴性。

假阳性的问题根源在于：受样本中大量的无关抗体干扰，导致假阳性等检测失真。

本发明是这样实现的：

本发明提供了一种PD-1生物制剂的抗体检测试剂盒，其包括抗体捕获器件和抗体检测器件，抗体捕获器件包括固相载体，抗体检测器件为纤维素膜或带有可被检测的标记物的功能性片段；且在固相载体上包被有PD-1生物制剂，在纤维素膜上固定有不带标记物的功能性片段；功能性片段为PD-1生物制剂的可变区、重链可变区或互补决定区。

发明人发现：用PD-1生物制剂作为捕获抗原，由于空间接触面大，更容易捕获到样本中的抗抗体，具有捕获效率高的优点。而借助双抗原夹心的方法实现抗抗体的检测，可以极大程度上规避大量的无关抗体干扰，提高检测准确度，避免假阳性的发生。

捕获后形成的抗原-抗体复合物本身具有较大的位阻，如果抗体检测器件的分子量较大（比如生物制剂），则较难与复合物中抗抗体的另一个Fab结合。发明人发现小分子量的PD-1生物制剂的可变区、重链可变区或互补决定区具有位阻小，更易于被抗抗体Fab结合的优势，以其作为抗体检测器件，可以提高抗原-抗体复合物与检测抗体元件结合效率，提高检测的灵敏度，避免假阴性的发生。达到PD-1生物制剂药物的伴随诊断目的。