[发明专利]一种降解PBAT地膜的枯草芽孢杆菌降解剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种降解PBAT地膜的枯草芽孢杆菌降解剂及其制备方法，它为枯草芽孢杆菌发酵液，枯草芽孢杆菌的保藏登记号为CGMCC No.20199，降解剂的制备方法包括以下步骤：步骤一，菌种活化；步骤二，种子液制备；步骤三，发酵液制备。本发明的有益效果：本发明的降解剂，采用生物菌种加速PBAT地膜的降解，不污染环境，降解效果好。

技术领域

本发明涉及生物降解剂领域，尤其涉及一种降解PBAT地膜的枯草芽孢杆菌降解剂及其制备方法。

背景技术

塑料产品由于成本低廉、不易腐烂和适用范围广泛等，在人类生活中被大量使用，但同时，自然环境中的塑料污染问题也愈发严重。特别在农业中，塑料地膜的使用在提高农业产量的同时也使农田中白色污染问题愈加严重。现阶段，农用地膜大部分为聚乙烯材料，其化学结构稳定并难以降解，残留在农田中的地膜会影响土壤结构与功能，甚至影响植物生长。目前对废弃塑料地膜的处置方式大多为填埋、焚烧、二次加工等，这些处理方式对环境的污染较大，且处理成本高。

近年来，生物降解地膜的出现在一定程度上减轻了农田中聚乙烯地膜的污染问题。其中，聚己二酸/对苯二甲酸丁二酯(Polyadipate/butylene terephthalate，PBAT)是一种可生物降解的聚合物，其具有良好的耐热性和延伸性，在土壤微生物作用下可降解为无毒小分子，对生态环境友好。目前全球PBAT产量占生物塑料总产量的7.2％，PBAT地膜已成为生物降解地膜中常见的一种，已经逐渐商业化。虽然PBAT属于可降解材料，但其在特定条件下才能达到较好的降解效果，实际应用过程中，其自然降解情况并不理想，随着应用量的逐年加大，降解量也越来越大，自然降解缓慢导致其也存在一定的污染性。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足而提供一种降解PBAT地膜的枯草芽孢杆菌降解剂及其制备方法。

为达到上述目的，本发明通过以下技术方案来实现。

一种降解PBAT地膜的枯草芽孢杆菌降解剂，它为芽孢杆菌发酵液，包含一株枯草芽孢杆菌，保藏登记号为CGMCC No.20199，另一株解淀粉芽孢杆菌，保藏登记号为CGMCCNO.18457，二者质量比为1-4：9-6；

所述芽孢杆菌的筛选方法：

第一步，土壤样品采集：采集有PBAT地膜自然降解处的土壤，土壤采样深度为5-10cm，将采集的土壤样品贮存于已经完全灭菌的透明封口袋、封口瓶内并编号，密封好，4℃冰箱中保存，备用；

第二步，初筛，将10.0g土壤样品加入到250mL的三角瓶中，装有100mL含有大小为3cm×3cm的300mg PBAT塑料地膜的无机盐液体培养基中，在37摄氏度，160rpm/min振荡培养，直至PBAT塑料地膜发生降解，以肉眼观察到PBAT塑料地膜明显降解成碎片状为指标，取培养液备用；

第三步，驯化，取第二步中的培养液10mL，接种到装有100mL含有大小为3cm×3cm的300mg PBAT塑料地膜的无机盐液体培养基中培养，进行二、三……N代，备用；

第四步，富集培养，将第三步中的第N代培养液转接到LB培养基中富集培养，备用。

进一步的，所述第二步中无机盐液体的质量配方为硝酸钾0.1-0.2份、磷酸铵0.2-0.4份、硫酸镁0.1-0.2份、磷酸二氢钾0.1-0.2份、硫酸镁0.2-0.3份，其余为水，PH 6.7-7.5。

降解剂的制备方法包括以下步骤：

步骤一，菌种活化：将-80℃下保存的菌株在LB固体培养基上活化12～16h，挑取单菌落在LB固体培养基上，在35℃培养1～2天，得活化的菌株；

步骤二，种子液制备：用无菌接种环刮取一环步骤一中活化的菌株接种到50ml LB液体培养基中，在温度为35℃、转速为160rpm/min条件下培养24h，得种子液；