[发明专利]一种降解PBAT地膜的枯草芽孢杆菌降解剂及其制备方法

权利要求书

1.一种降解PBAT地膜的枯草芽孢杆菌降解剂，其特征在于：它为芽孢杆菌发酵液，包含一株枯草芽孢杆菌，保藏登记号为CGMCC No.20199，另一株解淀粉芽孢杆菌，保藏登记号为CGMCC NO.18457，二者质量比为1-4：9-6；

所述芽孢杆菌的筛选方法：

第一步，土壤样品采集：采集有PBAT地膜自然降解处的土壤，土壤采样深度为5-10cm，将采集的土壤样品贮存于已经完全灭菌的透明封口袋、封口瓶内并编号，密封好，4℃冰箱中保存，备用；

第二步，初筛，将10.0g土壤样品加入到250mL的三角瓶中，装有100mL含有大小为3cm×3cm的300mg PBAT塑料地膜的无机盐液体培养基中，在37摄氏度，160rpm/min振荡培养，直至PBAT塑料地膜发生降解，以肉眼观察到PBAT塑料地膜明显降解成碎片状为指标，取培养液备用；

第三步，驯化，取第二步中的培养液10mL，接种到装有100mL含有大小为3cm×3cm的300mg PBAT塑料地膜的无机盐液体培养基中培养，进行二、三……N代，备用；

第四步，富集培养，将第三步中的第N代培养液转接到LB培养基中富集培养，备用。

2.根据权利要求1所述的一种降解PBAT地膜的枯草芽孢杆菌降解剂降解剂，其特征在于，所述第二步中无机盐液体的质量配方为硝酸钾0.1-0.2份、磷酸铵0.2-0.4份、硫酸镁0.1-0.2份、磷酸二氢钾0.1-0.2份、硫酸镁0.2-0.3份，其余为水，PH 6.7-7.5。

3.根据权利要求1所述的一种降解PBAT地膜的枯草芽孢杆菌降解剂降解剂，其特征在于，降解剂的制备方法包括以下步骤：

步骤一，菌种活化：将-80℃下保存的菌株在LB固体培养基上活化12～16h，挑取单菌落在LB固体培养基上，在35℃培养1～2天，得活化的菌株；

步骤二，种子液制备：用无菌接种环刮取一环步骤一中活化的菌株接种到50ml LB液体培养基中，在温度为35℃、转速为160rpm/min条件下培养24h，得种子液；

步骤三，发酵液制备：按照菌种、培养液体积比为1：120的比例将步骤二所得的种子液接入到车间发酵料培养基中，在温度为36.5-37.5℃，转速为120rpm/min条件下培养18h-24h，得发酵液，即为降解剂。

4.根据权利要求1所述的一种降解PBAT地膜的枯草芽孢杆菌降解剂，其特征在于：所述LB培养基的组成成分及其配比为细菌学蛋白胨10g/L，酵母提取粉5g/L，氯化钠10g/L。

5.根据权利要求3所述的一种降解PBAT地膜的枯草芽孢杆菌降解剂，其特征在于：所述车间发酵培养基的组成成分及其重量百分比为：黄豆粉1.0-1.6％、蔗糖0.1-0.5％、蛋白胨0.2-0.6％、玉米粉0.2-0.6％、碳酸钙0.3-0.9％、鱼粉0.1-0.3％、硫酸铵0.01-0.08％、硫酸镁0.02-0.05％、磷酸二氢钾0.01-0.04％、磷酸氢二钾0.02-0.05％、硫酸锰0.01-0.04％、氢氧化钠0.01-0.04％、氯化钠0.02-0.03％、消泡剂0.5-1.5％，用盐酸及氢氧化钠调节pH至6.8-7.5。

6.根据权利要求1所述的一种降解PBAT地膜的枯草芽孢杆菌降解剂，其特征在于：所述降解剂用水稀释至含菌量为3.5×10⁷cfu/ml。