[发明专利]一种用于腮腺炎病毒的规模化制备方法

说明书

本发明涉及一种用于腮腺炎病毒的规模化制备方法，属于生物医药技术领域。本发明提供了一种用于腮腺炎病毒的规模化制备方法，所述方法以细胞工厂作为腮腺炎病毒规模化制备的载体，并且，所述方法通过系统的比较，获得了腮腺炎病毒培养的最佳收换液组合，所述最佳收换液组合为间隔22~26h对病毒培养液进行收获，总共收获三~四次，前两~三次收获后需将新的细胞维持液注入细胞工厂；本发明提供的方法具有收获次数多，单次病毒收获液和混合病毒收获液的病毒滴度高，以及，细胞病变稳定等诸多优势，与转瓶工艺相比，所述方法生产得到的病毒收获液在质量和产量上均得到了显著的提高，有助于进一步提高腮腺炎减毒活疫苗的质量和产量。

技术领域

本发明涉及一种用于腮腺炎病毒的规模化制备方法，属于生物医药技术领域。

背景技术

流行性腮腺炎是由腮腺炎病毒（Mumps virus，MuV）引起的一种急性呼吸道传染病。其主要临床症状为发热、腮腺非化脓性肿痛；部分病例还会继发无菌性脑膜炎、胰腺炎、睾丸炎等；症状严重者可导致伤残或者死亡。流行性腮腺炎在我国属于法定管理的丙类传染病，目前尚缺乏特效药物，且抗生素治疗没有明显效果。现阶段，疫苗的预防接种仍然是对流行性腮腺炎唯一有效的预防和控制手段。

腮腺炎减毒活疫苗是用于控制流行性腮腺炎的疫苗中的重要产品，具有免疫效果好，免疫作用时间长、不需要佐剂刺激以及制备工艺方便的优势。在腮腺炎减毒活疫苗大量使用以前，全球各地的腮腺炎疫情泛滥；但是随着腮腺炎减毒活疫苗的广泛使用，腮腺炎的发病率被极大的控制。

腮腺炎减毒活疫苗的制备过程主要包括腮腺炎病毒减毒株的规模化生产（细胞制备+病毒接种+细胞换液+病毒收获）以及澄清两个步骤。其中，规模化生产得到高滴度的腮腺炎病毒减毒株收获液是腮腺炎减毒活疫苗批量化制备的前提条件，会直接影响到腮腺炎减毒活疫苗的质量和产量。

现阶段，主要通过转瓶工艺实现腮腺炎病毒减毒株的规模化生产。但是，转瓶工艺仍存在很多缺陷，例如，单个转瓶的细胞饲养面积有限，规模化生产需要大量转瓶，无菌控制风险更高；受操作手法等因素影响，可能漏液，造成规模化制备方法效果无法保障；厂房所用空间更大，相同体积的收获液，相较于细胞工厂需要更大的空间；转瓶的清洗和灭菌需要大量劳动力，收换液等操作自动化替代难度较大。克服上述缺陷对进一步提高腮腺炎减毒活疫苗的质量和产量十分重要。

发明内容

为解决现有腮腺炎减毒活疫苗的规模化制备方法存在的问题，本发明提供了一种用于腮腺炎病毒的规模化制备方法，所述规模化制备方法包括如下步骤：

细胞制备：制备鸡胚成纤维细胞悬液；

病毒接种：将腮腺炎病毒接种至鸡胚成纤维细胞悬液中后，添加至含有病毒生长液的细胞工厂中进行第一次培养；

细胞换液：第一次培养后，将细胞工厂中的病毒生长液导出，用缓冲液清洗细胞工厂；细胞表面清洗结束后，将细胞维持液注入细胞工厂中进行第二次培养；

病毒收获：第二次培养结束后，对细胞工厂中的病毒培养液进行收获；所述收获总共为三次或四次，每次收获间隔22~26h。

在本发明的一种实施方式中，所述收获包括如下步骤：

第一次收获：第二次培养结束后，将细胞工厂中的病毒培养液导出，并将细胞维持液注入细胞工厂中进行第三次培养；

第二次收获：第三次培养结束后，将细胞工厂中的病毒培养液导出，并将细胞维持液注入细胞工厂中进行第四次培养；

第三次收获：第四次培养结束后，将细胞工厂中的病毒培养液导出，并与第一次收获和第二次收获得到的病毒培养液合并，即得病毒收获液；

所述第三次培养和第四次培养的时间为22~26h。

在本发明的一种实施方式中，所述收获包括如下步骤：