[发明专利]用于粮食籽粒附着真菌DNA提取的试剂、试剂盒及提取方法

说明书

本发明公开了一种用于粮食籽粒附着真菌DNA提取的试剂、试剂盒及提取方法。所述DNA提取的试剂包含裂解液，所述裂解液包括NaCl、EDTA二钠、Tris‑HCl、N‑月桂酰基肌氨酸钠和ε‑聚赖氨酸。本发明的一种用于粮食籽粒附着真菌DNA提取试剂，针对真菌细胞结构特点，在裂解液体系中添加一定浓度配比的ε‑聚赖氨酸和N‑月桂酰基肌氨酸钠，在优化后的NaCl、EDTA二钠和Tris‑HCl常规缓冲体系中协同作用，不需要加热处理就能够充分、高效、快速的破坏真菌细胞结构，使蛋白质充分变性，与DNA有效分离，简单成分实现高提取效率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于粮食籽粒附着真菌DNA提取的试剂、试剂盒及提取方法。

背景技术

近年来，随着分子生物学的发展，基于基质(土壤、植物、动物、水体、空气等)附着微生物脱氧核糖核酸(DNA)，对微生物进行定量检测、多样性或功能性分析等技术不断完善，其中致病菌、产毒菌、腐败菌等微生物实时荧光定量核酸扩增检测法(qPCR)、数字PCR(dPCR)、测序等技术，在食品安全、临床诊断、环境监测、植物保护、生物防控等领域具有广泛的应用。在粮食行业，通过分子生物学分析，深入研究粮食真菌群落组成差异与其生产气象信息、种植条件、储藏条件等相关因素的关系，可以为产毒真菌及真菌毒素污染防控提供精准的解决思路。但是，相关分子生物学技术检测结果的准确性是建立在对粮食基质样品携带的全部真菌DNA充分提取的基础之上的。

传统方法提取的DNA质量较高，但需要大量生物样本，步骤繁杂，费时、费力，并且需接触苯酚、氯仿等有毒有害试剂；离心柱法采用硅胶膜吸附DNA，虽然获得的DNA纯度较高，但是得率低，不适用于菌体量较少及定量检测等相关研究，并且该方法仍然需要反复离心操作，不便于高通量、自动化的实现；而采用磁珠为载体的分离技术，无需大量检材，无需离心，也无需接触酚/氯仿等有毒试剂，利用磁珠的特异性吸附功能基团从裂解液中吸附基因组DNA，经过洗涤、洗脱即可获得高质量的DNA，且操作简单快速，可以实现自动化，能够满足样品数量多的提取需求，应用前景广阔。

市场上现有的磁珠法DNA提取试剂盒针对不同基质，如动物组织、植物、血液、唾液、尿液、病毒、细菌、土壤等均有相应的产品，但是真菌方面相对较少，一般建议与植物共用。相关专利报道，如一种磁珠法提取核酸的裂解液及使用该裂解液提取核酸的方法，申请号CN201911004165.5；一种基于磁珠法的快速、不加热的核酸提取试剂盒，申请号CN201910054554.2；一种用于磁珠法核酸提取的试剂盒、磁珠及其制备方法申请号CN201911311308.7等，这些方法针对不同的基质材料，开发了相应的裂解及分离纯化体系，实现了快速、高效的DNA提取过程。不同基体细胞结构存在较大差异，其中真菌细胞结构尤其复杂，在与粮食基质混合后，提取裂解液对于其中真菌的裂解效率，显著影响着其DNA的终产量。另外，为了保证裂解效果，现有技术裂解过程普遍采用蛋白酶K等生物活性酶并辅助56℃～65℃加热处理，直接影响了整个提取流程的简便性、时效性和自动化的实现。

发明内容

为此，本发明提供一种用于粮食籽粒附着真菌DNA提取的试剂、试剂盒及提取方法。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明实施例提供一种用于粮食籽粒附着真菌DNA提取的试剂，所述DNA提取的试剂包含裂解液，所述裂解液包括浓度为0.5mol/L～1.4mol/L的NaCl、浓度为10mmol/L～50mol/L的EDTA二钠、浓度为20mmol/L～100mmol/L PH＝7.5～8.0的Tris-HCl、质量百分比为1％～6％的N-月桂酰肌氨酸钠、浓度为5mmol/L～50mmol/L的ε-聚赖氨酸。