[发明专利]用于粮食籽粒附着真菌DNA提取的试剂、试剂盒及提取方法

权利要求书

1.一种用于粮食籽粒附着真菌DNA提取的试剂，其特征在于，

所述DNA提取的试剂包含裂解液，所述裂解液包括浓度为0.5mol/L～1.4mol/L的NaCl、浓度为10mmol/L～50mol/L的EDTA二钠、浓度为20mmol/L～100mmol/L，PH＝7.5～8.0的Tris-HCl、质量百分比为1％～6％的N-月桂酰肌氨酸钠、浓度为5mmol/L～50mmol/L的ε-聚赖氨酸。

2.如权利要求1所述的用于粮食籽粒附着真菌DNA提取的试剂，其特征在于，

所述DNA提取试剂还包括结合液，所述结合液包括质量百分含量为5％～30％的PEG8000、浓度为1mol/L～5mol/L的NaCl。

3.如权利要求1所述的用于粮食籽粒附着真菌DNA提取的试剂，其特征在于，

所述DNA提取试剂还包括第一清洗液和第二清洗液；

其中，所述第一清洗液包括体积百分比为30％～80％乙醇、浓度为1mol/L～6mol/L的异硫氰酸胍；

所述第二清洗液为体积百分比为70％～80％乙醇。

4.一种用于粮食籽粒附着真菌DNA提取的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3中任一所述DNA提取的试剂。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，

所述试剂盒还包括磁珠和洗脱缓冲液；

所述磁珠为内核具有超顺磁性的纳米微球，外部包被二氧化硅羧基修饰材料，磁珠的粒径为280-320nm，浓度为50-100mg/mL；

所述洗脱缓冲液为TE缓冲液，包含10mM Tris-HCl和1mM EDTA二钠，pH 8.0。

6.权利要求1-3任一所述的用于粮食籽粒附着真菌DNA提取的试剂或权利要求4-5任一所述试剂盒在提取粮食籽粒附着真菌DNA中的应用。

7.一种用于粮食籽粒附着真菌DNA提取的提取方法，其特征在于，

所述方法包括如下步骤：

1)收集菌体：称取粮食籽粒样本至含有石英砂、无菌生理盐水和吐温80 的离心管中，涡旋震荡静置后取上清液离心收集菌体；

2)裂解：向所述菌体中加入权利要求1中所述的裂解液并进行均质处理，离心取上清液；

3)结合：向所述上清液中加入权利要求2中所述的结合液和权利要求5所述的磁珠，涡旋吸附，在磁场的作用下留存磁珠；

4)清洗：分别用权利要求3所述的第一清洗液和第二清洗液洗涤磁珠，在磁场的作用下留存磁珠；

5)洗脱：加入预热的权利要求5所述的洗脱缓冲液对所述磁珠进行洗脱，收集洗脱液，获得所述附着真菌DNA提取液。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，

所述洗脱先采用65℃预热的TE缓冲液涡旋30s，再65℃水浴30s，交替进行2-3次。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，

所述粮食籽粒样本与石英砂、无菌生理盐水和吐温80的质量体积比为3g:3g:15mL:5μL。