[发明专利]一种检测MTHFR基因多态性的引物组及试剂盒

说明书

本发明涉及基因检测领域，特别是涉及一种检测MTHFR基因多态性的引物组及试剂盒，所述试剂盒中包括PCR反应物和质控品，所述PCR反应物包括第一反应物和第二反应物，所述第一反应物包括第一引物对、MTHFR 677C探针、内参基因引物对和内参基因探针，第二反应物包括第二引物对、MTHFR 677T探针、内参基因引物对和内参基因探针；第一引物对包括检测MTHFR 677C的上下游引物；第二引物对包括检测MTHFR 677T的上下游引物。本发明的试剂盒无需复杂的核酸提取纯化步骤，直接将血卡/全血样本中释放核酸用于荧光PCR扩增，减少实验检测步骤、检测成本、检测周期和提高安全性，满足临床的需求。

技术领域

本发明涉及基因检测领域，特别是涉及一种检测MTHFR基因多态性的引物组及试剂盒。

背景技术

5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)能催化5,10-亚甲基四氢叶酸产生5-甲基四氢叶酸，参与甲基传递与核苷酸合成，是叶酸代谢过程的关键酶。MTHFR基因位于1号染色体1p36.3位置，其基因位点突变对酶的活性和热稳定性产生影响，从而影响叶酸和甲硫氨酸代谢。该基因最常见的单核苷酸多态性为c.677CT，在中国发生率为45.2％。MTHFR基因677CT位点突变可造成其编码的氨基酸由丙氨酸变成缬氨酸，引起耐热性和酶活性下降，杂合MTHFR基因c.677位点(CT)酶活性下降30％，纯合MTHFR基因c.677位点(TT)酶活性下降65％以上。在低叶酸的环境下，纯合MTHFR基因c.677位点(TT)可显著升高血浆同型半胱氨酸浓度，从而引起静脉栓塞、肺栓塞、动脉粥样硬化、脑卒中等疾病，携带MTHFR基因c.677位点(TT)基因型的母亲在低叶酸环境下生育神经管缺陷的病儿的风险也将增加。因此，对MTHFR基因c.677位点多态性进行检测，可以及时发现个体对叶酸的吸收水平，从而实现叶酸缺乏疾病的高风险评估和降低新生儿出生缺陷风险，具有重要的临床意义。

目前，用于检测MTHFR基因c.677位点多态性的方法有限制性片段长度多态性聚合酶链反应技术(PCR-RFLP)、Sanger测序法、焦磷酸测序法、荧光PCR法、基因芯片、片段分析法和高分辨率熔解曲线法等。其中Sanger测序法、焦磷酸测序法、基因芯片、片段分析法和高分辨率熔解曲线法均需昂贵设备、操作较复杂、检测时间长、检测成本高，而PCR-RFLP法虽然无需昂贵设备，但是该方法其操作复杂，步骤繁多，也不适合临床推广。此外，因稳定、易采集和保存等优点，全血是临床常见的检测样本类型。上述方法均需要提取和纯化样本的核酸，而核酸提取纯化流程不仅增加实验检测步骤、检测成本，检测周期，而且存在因操作失误导致检测失败的可能。因此，难以满足临床对检测简单、快速、准确的需求。

为解决以上问题，本领域亟需建立一种操作简便、检测快速、成本低、灵敏度高且结果准确的MTHFR基因型检测试剂盒，从而满足临床检测需求。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种检测MTHFR基因多态性的引物组及试剂盒，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种检测MTHFR基因多态性的引物组，所述引物组包括以下中的一对或多对引物：

1)第一引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的MTHFR 677C上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的MTHFR 677C下游引物；

2)第二引物对：包括核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的MTHFR 677T上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的MTHFR 677T下游引物。

本发明还提供一种检测MTHFR基因多态性的试剂盒，所述试剂盒中包括PCR反应物和质控品，所述PCR反应物包括第一反应物和第二反应物，所述第一反应物包括所述第一引物对，第二反应物包括所述第二引物对。

如上所述，本发明的检测MTHFR基因多态性的引物组及试剂盒，具有以下有益效果：