[发明专利]一株分泌抗乙螨唑单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

说明书

本发明公开了一株分泌抗乙螨唑单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，该杂交瘤细胞株AZX，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.45015。所述杂交瘤细胞株AZX可以分泌产生对乙螨唑具有较好亲和力和较高灵敏度，对乙螨唑的50％抑制浓度IC50为4.04ng/mL，可用于制备乙螨唑的免疫检测试剂盒以及胶体金试纸条，为食品中乙螨唑的检测提供有力的检测方法及手段。

技术领域

本发明属于食品安全免疫检测技术领域，具体涉及一株分泌抗乙螨唑单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用。

背景技术

乙螨唑(etoxazole)是日本住友化学最新研制的恶唑类新型专用杀螨剂。对柑橘、棉花、苹果、花卉、蔬菜等作物的叶螨、始叶螨、全爪螨、二斑叶螨、朱砂叶螨等螨类有卓越的防治效果。其作用方式是抑制螨卵的胚胎形成以及从幼螨到成螨的蜕皮过程，对卵及幼螨有效，对成螨无效。通过抑制螨卵的胚胎形成及从幼螨到成螨的蜕皮过程而杀死害螨，有触杀和胃毒作用，无内吸性，但有较强的渗透能力，耐雨水冲刷。有研究报道乙螨唑对人类外周血淋巴细胞有负面影响，可导致遗传毒性和细胞毒性，对人类健康造成潜在威胁。

有关乙螨唑药物残留在动物组织中的检测方法，国内外已有少量报道，主要是用高效液相色谱～荧光检测器检测法及液相色谱一串联质谱法。提取的方法也各有不同，有液—液萃取、液—固萃取等。仪器检测方法可进行定量分析并具有较低的检测限，但是通常需要昂贵的仪器和复杂的操作，前处理及检测时间长，严重制约了这些检测方法的推广。而免疫分析方法具有低成本、高通量、高灵敏、对技术人员相对要求低等特点，因此适用于大量样品的快速筛查。本发明的目的在于提供一种对乙螨唑具有较高亲和力和检测灵敏度的单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备方法。为间接竞争ELISA试剂盒以及胶体金试纸条的研发推广奠定了基础。

发明内容

发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供一株抗乙螨唑单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，由该细胞株制备的单克隆抗体对乙螨唑具有较好的亲和力和灵敏度，可以用来建立乙螨唑酶联免疫检测方法，或建立胶体金免疫层析试纸条快速检测方法。

技术方案：为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

本发明的第一个目的是，提供一株分泌分泌抗乙螨唑单克隆抗体杂交瘤细胞株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称单克隆细胞株AZX，保藏编号为CGMCC No.45015，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

本发明的第二个目的是，提供一种抗乙螨唑单克隆抗体，由保藏编号为CGMCC No.45015的单克隆细胞株AZX分泌产生。

本发明的第三个目的是，提供一种抗乙螨唑半抗原，所述抗乙螨唑半抗原为带羧基的乙螨唑衍生物，结构如下式(Ⅰ)所示：

本发明的第四个目的是，提供一种上述的抗乙螨唑半抗原的合成方法，包括以下步骤：

S1、化合物1即1-叔丁基-3-甲氧基苯溶于二氯甲烷，冷却至-5～0℃，加入氯乙酰氯、无水氯化铝，反应后经萃取分离得黄色油状化合物2；

S2、室温下，化合物2溶于乙醇水溶液，加入甲酸钠搅拌反应，除去溶剂，得淡白色固体化合物3；

S3、化合物3溶于乙酸钠的甲醇溶液，加入盐酸羟胺，加热至50℃～60℃保持2-4小时，冷却至室温并浓缩，萃取浓缩得到淡黄色固体化合物4；

S4、化合物4溶于乙醇和四氢呋喃，加入催化剂，氢化，滤除催化剂，得浅棕色固体化合物5；

S5、化合物5、三乙胺溶于四氢呋喃中冷却并搅拌，加入4-溴-2,6-二氟苯甲酰氯，室温下搅拌5-8小时，过滤浓缩得棕色固体化合物6；