[发明专利]维生素D及其代谢产物的检测方法

说明书

本发明提供一种维生素D及其代谢产物的检测方法，涉及检测技术领域。本发明的检测方法包括以下步骤：分别配制25‑OHD及其代谢产物24,25‑(OH)₂D的标准溶液；取25‑OHD和24,25‑(OH)₂D的内标物以及雌三醇，配制成内标液；取标准溶液和待测血清样本，经处理后得到待测血清样品；将标准样品注入液相色谱串联质谱仪中进行检测，构建标准曲线，将待测血清样品注入液相色谱串联质谱仪进行检测，将检测图谱与标准曲线进行比较，得到检测结果。本发明的检测方法具有检测时间短、灵敏度高等优点。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，特别是涉及一种维生素D及其代谢产物的检测方法。

背景技术

维生素D是类固醇衍生物，主要包括维生素D2(麦角钙化醇)和维生素D3(胆钙化醇)。维生素D的主要生理作用是调节钙的代谢，维持骨骼健康；维生素D还可通过噬菌作用而增强免疫力，在抗肿瘤活性和免疫功能调节方也面发挥着重要作用。研究表明，动脉硬化、高血压、冠心病、糖尿病、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、慢性感染性疾病、自身免疫病等慢性病的发生也与维生素D缺乏具有相关性。

人体中的维生素D在肝脏内被25-羟基氧化酶氧化成25-羟基维生素D(25-OHD)，进而经由肾脏再进一步羟基化作用，转变为1,25-双羟基维生素D(1,25-(OH)₂D)或24,25-双羟基维生素D(24,25-(OH)₂D)。25-OHD是维生素D在体内的稳定存在形式，也是人体内的主要循环形式，其含量能客观的反映人体内维生素D的水平，可对25-OHD的浓度进行检测来评价人体的维生素D营养水平。

25-OHD是评价维生素D营养水平的重要指标。在CYP24A1突变导致的特发性高钙血症患者中，25-OHD失活途径受阻，导致无法代谢生成24,25-(OH)₂D，体内24,25-(OH)₂D含量明显降低。目前临床并没有较好的方法进行查因，一般通过基因进行确诊，但是基因费用昂贵，且检测周期较长，有报道称若能精准检测25-OHD与24,25-(OH)₂D的含量，其比值可作为筛查CYP24A1突变的临床检查指标，用于临床不明原因的高钙血症的查因。

目前，已有较多的免疫方法用于25-OHD的检测，但免疫方法受结构类似物的干扰，容易导致结果偏差，24,25-(OH)₂D在人体内的浓度较低(血清中的浓度约为1～13nmol/L)，尚未开发出免疫或发光方法进行检测；而质谱的方法也多是检测25-OHD，检测其代谢产物24,25-(OH)₂D的方法较少；色谱分析时间较长，且多采用衍生化的方法提高其检测灵敏度，但衍生化的方法一般操作复杂，且试剂对人体存在潜在危害。

发明内容

基于此，有必要针对上述问题，提供一种维生素D及其代谢产物的检测方法，该方法为可同步检测25-OHD和24,25-(OH)₂D，检测时间短、灵敏度高，而且检测过程未进行衍生化处理，可避免衍生化试剂对环境和人体的危害。

一种维生素D及其代谢产物的检测方法，包括以下步骤：

配制标准溶液：分别取25-OHD₂标准品、25-OHD₃标准品、24,25-(OH)₂D₂标准品和24,25-(OH)₂D₃标准品，用牛血清白蛋白溶液配制成预定浓度的溶液，得到标准溶液；

配制内标液：取25-OHD₂内标物、25-OHD₃内标物、24,25-(OH)₂D₃内标物和雌三醇，以溶剂溶解，得到内标液；