[发明专利]猪烈性传染病病原体多联检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.猪烈性传染病病原体多联检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括扩增非洲猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸道综合征病毒、经典猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒的4个基因位点的特异性引物及荧光探针；其中，4个基因位点为：非洲猪瘟病毒的VP72基因，猪繁殖与呼吸道综合征病毒的N基因，经典猪瘟病毒的5’UTR基因，猪伪狂犬病毒的gD基因；以及猪内参基因ACTB的特异性引物和荧光探针。

2.根据权利要求1所述的猪烈性传染病病原体多联检测试剂盒，其特征在于，所述特异性引物及荧光探针序列如下：ASFV、SEQ ID NO.1-3；PRRSV、SEQ ID NO.4-6；CSFV、SEQ IDNO.7-9；PRV、SEQ ID NO.10-12；Sus、SEQ ID NO.13-15。

3.根据权利要求1所述的猪烈性传染病病原体多联检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含PCR反应液Ⅰ和PCR反应液Ⅱ；其中，PCR反应液Ⅰ包括SEQ ID NO.1-2、SEQ ID NO.4-5、SEQ ID NO.13-14所示的特异性引物，以及SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.15所示的荧光探针；PCR反应液Ⅱ包括SEQ ID NO.7-8、SEQ ID NO.10-11所示的特异性引物，以及SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.12所示的荧光探针。

4.根据权利要求1所述的猪烈性传染病病原体多联检测试剂盒，其特征在于，所述特异性引物和荧光探针在扩增体系中的终浓度为：SEQ ID NO.1为0.2μM，SEQ ID NO.2为0.2μM，SEQ ID NO.3为0.2μM，SEQ ID NO.4为0.2μM，SEQ ID NO.4为0.2μM，SEQ ID NO.6为0.2μM，SEQ ID NO.7为0.12μM，SEQ ID NO.8为0.12μM，SEQ ID NO.9为0.12μM，SEQ ID NO.10为0.12μM，SEQ ID NO.11为0.12μM，SEQ ID NO.12为0.12μM，SEQ ID NO.13为0.12μM，SEQ IDNO.14为0.12μM，SEQ ID NO.15为0.12μM。

5.根据权利要求1所述的猪烈性传染病病原体多联检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：dNTP为0.2mM，Taq酶为2.5U，RTase为50U，RNase Inhibitor为10U，MgCl₂为4mM。

6.根据权利要求1所述的猪烈性传染病病原体多联检测试剂盒，其特征在于，SEQ IDNO.3的5’端采用荧光染料6-FAM标记，SEQ ID NO.6的5’端采用荧光染料HEX标记，SEQ IDNO.15的5’端采用荧光染料CY5标记，SEQ ID NO.9的5’端采用荧光染料6-FAM标记，SEQ IDNO.12的5’端采用荧光染料HEX标记。

7.权利要求1-6任一所述试剂盒在针对单个样品同时检测非洲猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸道综合征病毒、经典猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述试剂盒对非洲猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸道综合征病毒、经典猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒的检测灵敏度均达到500拷贝/反应。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，针对单个样品同时检测非洲猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸道综合征病毒、经典猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒的具体方法为：在核酸提取壳体的样品孔中加入待检测的样品，样品经过整个核酸提取流程后得到样品中纯化的核酸，然后将所得纯化核酸转移至装有检测冻干试剂的核酸检测壳体中，冻干试剂与液体的纯化核酸接触后复溶为完整的核酸扩增体系，最后通过添加密封试剂即可进行样品检测，待整个核酸扩增过程结束后，检测仪器会自动对检测结果进行判断。