[发明专利]一种色谱分离甘油葡萄糖苷的方法

说明书

本发明提供一种色谱分离甘油葡萄糖苷的方法，其采用特别制备的吸附分离树脂，尤其是采用所述吸附分离树脂的多分离器模拟移动床色谱分离装置，能够在用水作流动相的条件下，对甘油葡萄糖苷与甘油、果糖/葡萄糖具有较高的分离效率，甘油葡萄糖苷收率≥85％，浓缩所得甘油葡萄糖苷产品的纯度≥90％甚至≥99％；对甘油、果糖、葡萄糖也具有较高的分离效率。

技术领域

本发明属色谱分离技术领域，具体涉及一种色谱分离甘油葡萄糖苷的方法。

背景技术

立体构型为2-O-α-D-甘油葡糖苷，简称2-αGG，俗名甘油葡萄糖苷、甘油葡萄糖醚。因具有重要的生理功能，2-O-α-D-甘油葡糖苷在化妆品和保健医疗领域表现出了巨大潜力；研究表明其主要应用效果包括皮肤保湿保健、龋齿预防、抑制脂肪细胞内中性脂的累积、抗过敏及抗癌等。通常，甘油葡萄糖苷产品的指标要求中，2-O-α-D-甘油葡萄糖苷的含量是≥90wt％。

目前制备2-O-α-D-甘油葡糖苷的主要方法是酶催化合成法。该法主要包括以下步骤：(1)在含蔗糖磷酸化酶的水溶液中，加入蔗糖、甘油，或含蔗糖、甘油的溶液进行反应，生成含果糖、2-O-α-D-甘油葡萄糖苷的料液，2-O-α-D-甘油葡萄糖苷的浓度可达100g/L以上，料液中通常还含少量甘油、葡萄糖；(2)所述含果糖、2-O-α-D-甘油葡萄糖苷的料液，经过滤、脱色、脱盐，得含果糖、2-O-α-D-甘油葡萄糖苷的水溶液；(3)含果糖、2-O-α-D-甘油葡萄糖苷的水溶液稀释或浓缩，经液相色谱如模拟流动床进行分离，获得含甘油葡萄糖苷溶液；(4)含甘油葡萄糖苷溶液浓缩或分离洗脱剂，得纯度90％以上的2-O-α-D-甘油葡萄糖苷浆液。所用吸附分离树脂的性能是关键所在。

CN113061152A提供一种利用氨基型树脂分离纯化甘油葡萄糖苷的方法，用以分离由酶合成GG产生的糖类物质，得到高纯度的GG溶液；所述氨基树脂是采用树脂LX-950转型制备得到，所述转型制备步骤为：先用4％氢氧化钠和4％盐酸对树脂进行交替洗脱，再用4％赖氨酸转型，并用液相监控，当树脂吸附赖氨酸饱和后用纯水洗至中性，得到氨基型树脂。分离GG时所用洗脱剂为水，更优选为80％体积分数的乙腈水溶液。该方法中，在用水作洗脱剂时的分离效率很低；用乙腈水溶液作洗脱剂时的分离效率较高，但存在毒性，并需要在GG溶液的浓缩过程中充分分离；因而该方法很难有工业应用价值。

现有采用吸附树脂分离甘油葡萄糖苷的液相色谱法，也往往存在对甘油葡萄糖苷分离效率不够高的问题，以及不能将甘油与果糖、葡萄糖适度分离或充分分离的问题，尤其是在用水作洗脱剂的条件下。对甘油葡萄糖苷分离效率不够高的结果，包括分离所得甘油葡萄糖苷溶液浓度≤10wt％、甘油葡萄糖苷的分离收率≤85％、浓缩所得甘油葡萄糖苷产品中的2-O-α-D-甘油葡萄糖苷含量≤90wt％。分离甘油的目的是返回所述含蔗糖磷酸化酶水溶液中，重新作为2-O-α-D-甘油葡萄糖苷的反应原料使用，甘油浓度应≥5wt％，最好≥10wt％；甘油、甘油葡萄糖苷的重量浓度比应≥3，最好≥6。果糖、葡萄糖二者间的分离效果不是关键目标，但通常需要与甘油适度分离或充分分离，所得果糖和/或葡萄糖溶液中果糖+葡萄糖、甘油的重量浓度比，≥10时可直接作为底物料液用于其它发酵过程，≥100时可浓缩作为甜味剂售出。但采用现有吸附树脂并用水作洗脱剂的条件下，都不易达到对甘油的所述分离效果。

因而，有必要开发一种色谱分离甘油葡萄糖苷的方法，其采用合适的吸附分离树脂，能够在以水作洗脱剂的条件下，实现上述技术效果。

发明内容