[发明专利]一种中生菌素F组分母药及其制备方法

说明书

本发明一种中生菌素F组分母药及其制备方法，包括以下步骤：（1）配制生产试管斜面培养基，并在斜面上接入链霉菌，进行培养；当斜面培养基中长出单菌落时用接种针挑出单菌落进入下一步培养；（2）配制菌种发酵的种子培养基，并接种步骤（1）的单菌落进行培养，得到种子培养液；（3）配制发酵罐培养基，接入上步骤（2）得到的种子培养液，其中，种子培养液与发酵培养液体积比为10%‑15%；（4）将发酵液经过过滤、离子交换、洗脱、浓缩、脱色、降温、干燥步骤后得到中生菌素母药。该方法可制造含有60.8‑78.7wt%的中生菌素F组分的母药，填补了高纯度中生菌素母药的空白，为混配制剂和含量高于12%农药产品生产开发提供了原料药。

技术领域

本发明属于农药领域，具体涉及一种中生菌素F组分母药及其制备方法。

背景技术

中生菌素（zhongshengmycin）又名农抗751菌素、链丝菌素，属N-糖苷类抗生素。根据文献报道，浅灰色链霉菌海南变种（Streptomyces lavendulae var heinanensisn.var）和秦岭链霉菌（Streptomyces qinlingnensis sp. nov）等多个链霉菌均能产生中生菌素。中生菌素抗菌谱广，能抗革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌、分枝杆菌、酵母菌及丝状真菌等，对昆虫也有一定的杀灭作用。其杀菌机理是能够抑制polyU引导的多肽合成，并能导致蛋白翻译中的错读，使细菌不能合成蛋白质而死亡。中生菌素在农业上偏重于水稻白叶枯、黄瓜细菌性角斑病、白菜软腐病、杆菌溃疡病等细菌性病害，也可用于苹果轮纹病、黄瓜霜霉病、灰霉病、白粉病和番茄晚疫病等真菌性病害的防治。中生菌素有多个有效组分，其中，中生菌素F组分是中生菌素中具有较高农药利用价值的组分之一。F组分结构如下（n=1）：

由于具有显著且直接杀菌作用，因此产生中生菌素的链霉菌在自然界比较容易被发现并分离得到。本发明在长期的野外菌种采集分离中多次得到产生中生菌素的菌株。2003年从蒲城土壤中分离得到一株放线菌，公司菌株编号Ⅱ-D190515，经形态、生理生化、细胞壁特征及分子生物学等特征判断为一株链霉菌。产物分离鉴定发现抑菌成分以中生菌素C、D、F组分为主，未发现报道的中生菌素A和X组分，且B、E组分含量低。随后陕西麦可罗生物科技有限公司菌种中心进行了长期持续不断的单一紫外诱变筛选，得到菌株ZS-Ⅱ-D190515（2019年经中科院微生物所鉴定，结果同为链霉菌），随后开展了培养基和培养条件优化，液体发酵，产物分离鉴定，活性测试等方面的研究，其具体表征如如图1-3所示。在相关高校和科研单位的协助下，2015-2020年开始采用10M3发酵罐，深层液体发酵试验，产物试样以乙腈+水+庚烷磺酸钠+磷酸氢二钠+磷酸为流动相，使用RP-C18为填料的不锈钢柱和紫外检测器，在波长200nm对试样中各组分进行高效液相色谱分离，发现产物以中生菌素F为主，未发现A和X组分，同时BCDE等它组分含量低。

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述技术问题， 本发明提供一种中生菌素F组分母药及其制备方法。该方法可制造含有60.8-78.7wt%的中生菌素F组分的母药，产品含量远高于目前农业部登记的12%中生菌素母药，溶解于水，不溶物小于0.2%，填补了高纯度中生菌素母药的空白，为混配制剂和含量高于12%农药产品生产开发提供了原料药。

为了实现发明目的，本发明采用如下技术方案：一种中生菌素F组分母药的制备方法，包括以下步骤：

（1）配制生产试管斜面培养基，并在斜面上接入链霉菌，进行培养；当斜面培养基中长出单菌落时用接种针挑出单菌落进入下一步培养；

（2）配制菌种发酵的种子培养基，并接种步骤（1）的单菌落进行培养，得到种子培养液；

（3）配制发酵罐培养基，接入上步骤（2）得到的种子培养液，其中，种子培养液与发酵培养液体积比为10%-15%；

（4）将发酵液经过过滤、离子交换、洗脱、浓缩、脱色、降温、干燥步骤后得到中生菌素母药。

更为优选的，所述的制备方法包括以下步骤：