[发明专利]含维生素D3

说明书

本发明公开了含维生素D₃的制剂中有关物质的高效液相检测方法及供试品溶液的制备方法，本发明供试品溶液的制备方法提取率高、且重现性好，适于推广应用；且供试品溶液制备方法用到的有机溶剂种类相对较少、毒性相对较低，减少了实验人员的操作风险。本发明首次采用反相高效液相系统对含低剂量维生素D₃的制剂中的有关物质进行检测，相比现有技术中的正相检测系统，其专属性更强、重现性更好、灵敏度更高，采用本发明的梯度洗脱方式，各主峰与杂质峰均可被检出并良好分离，并且主峰的响应度高，可有效控制含维生素D₃的制剂的质量。

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种含维生素D₃的制剂中有关物质的高效液相检测方法及高效液相检测方法中所用的供试品溶液的制备方法。

背景技术

维生素D₃是一种脂溶性维生素，也被看作是一种作用于钙、磷代谢的激素前体。常与碳酸钙、维生素A或多种维生素和矿物质组合在一起形成复方制剂，常见的含维生素D₃的制剂有碳酸钙D₃片、碳酸钙D₃咀嚼片、碳酸钙D₃颗粒剂、维D钙咀嚼片、儿童维D钙咀嚼片、碳酸钙D₃元素片、维生素AD软胶囊等，其中维生素D₃的含量为30IU-245IU。

维生素D₃遇光或空气均易变质，中国药典规定的维生素D₃原料药贮存方式为遮光、充氮、密封、在冷处保存。由于维生素D₃遇光或空气易氧化和光解生成前维生素D₃、反式维生素D₃、光甾醇3和速甾醇3等杂质，在进行制剂研究时，如何保证维生素D₃稳定是制剂厂家首要解决的问题，故越来越多制剂厂家采用维生素D₃包合物作为原料进行制剂研究。维生素D₃包合物由于包和的特殊性，在进行提取前首先需要将包合物溶解，使维生素D₃分散出来，选择的预处理溶剂应能溶解包合物且不破坏维生素D₃，同时还应具备溶解维生素D₃的能力。现有技术中针对样品的处理流程较为繁琐，增加了有效成分的损耗，且提取率低、重现性差，进一步导致检测灵敏度降低。

目前药典方法仅公布了维生素D₃原料有关物质检测方法，含色谱条件和供试品溶液配制方法，部分专利或文献公布了碳酸钙D₃咀嚼片供试品制备方法及正相系统检测有关物质的方法，这些方法经申请人重现，发现由于供试品溶液制备过程中提取率低，导致检测的平行样本重现性差。

现有技术申请公布号为CN109709237A的发明专利，公开了一种碳酸钙D₃咀嚼片的有关物质检测方法，具体公开了供试品溶液的制备方法和液相检测方法，该提取溶液的配制方法繁琐，使用了多种毒性的有机溶剂，实验人员操作风险高。同时，申请人发现有效成份不能提取完全、重现性差、灵敏度低。

现有技术中申请公布号为CN111239272A的发明专利，公开了一种检测含维生素D₃的制剂中有关杂质的方法，具体公开了供试品溶液的制备方法和液相检测方法。其专利说明书中未公开制剂中维生素D₃的含量，申请人尝试将该方法用于维生素D₃含量较低的碳酸钙D₃咀嚼片(维生素D₃的含量为125IU)或碳酸钙D₃片(维生素D₃的含量为60IU)的有关物质检测，发现提取率低，每次提取的提取率差异大，重现性差、灵敏度低。另外，该提取方法中乙醇、水和正己烷三者直接混合，由于乙醇和正己烷可互溶，这三者混合很难分层，即使实现了分层，也难以萃取完全。并且提取和萃取同步进行，还可能造成提取和萃取均不完全，影响最终的测定结果。