[发明专利]核酸的检测

权利要求书

1.一种用于检测靶核酸的复合物，所述复合物包含：

1) 靶核酸，其包含邻近第二区域的第一区域；

2) 与所述第一区域杂交的可检测地标记的捕获探针；

3) 用猝灭剂或荧光受体标记的查询探针，所述猝灭剂或荧光受体与所述捕获探针的标记相容，

其中所述查询探针以大于0.1 min^-1的动力学速率常数k_off和/或大于0.1 min^-1的动力学速率常数k_on重复地杂交所述第二区域。

2.权利要求1的复合物，其中所述捕获探针和所述查询探针连接以提供分子内探针。

3.权利要求1的复合物，其中所述靶核酸具有热力学稳定性地结合所述捕获序列，且所述靶核酸发生与所述查询探针的短暂结合。

4.权利要求1的复合物，进一步包含使所述查询探针和所述捕获探针结合至表面的地址链。

5.权利要求4的复合物，其中微阵列包含所述地址链。

6.权利要求4的复合物，其中所述地址链在序列上与所述靶核酸无关，这是因为相互作用通过所述查询和捕获探针间接地发生。

7.一种用于检测靶核酸的方法，所述方法包括：

a) 使可检测地标记的捕获探针与包含邻近第二区域的第一区域的靶核酸的所述第一区域杂交；

b) 提供用猝灭剂或荧光受体标记的查询探针，所述猝灭剂或荧光受体与所述捕获探针的标记相容，

其中所述查询探针以大于0.1 min^-1的动力学速率常数k_off和/或大于0.1 min^-1的动力学速率常数k_on重复地杂交所述第二区域；和

c) 记录所述查询探针标记的荧光强度的时间依赖性变化。

8.权利要求7的方法，其中所述捕获探针和所述查询探针连接以提供分子内探针。

9.权利要求7的方法，其中：

- 使用荧光强度的时间依赖性变化中转换的数目将靶核酸与背景信号、非靶核酸和/或所述查询探针的假结合区分开；

- 使用采样时间来鉴别所述靶核酸的存在；

- 使用荧光强度的时间依赖性变化的统计分析来检测、定量和/或鉴别所述靶核酸；和/或

- 使用荧光强度的时间依赖性变化的模式来检测、定量和/或鉴别所述靶核酸。

10.权利要求7的方法，进一步包括使所述查询探针和所述捕获探针结合至表面的地址链。

11.权利要求10的方法，其中微阵列包含所述地址链。

12.权利要求7的方法，其中记录所述查询探针标记的荧光强度的时间依赖性变化包括成像。

13.权利要求7的方法，其中将所述查询探针标记的荧光强度的时间依赖性变化记录1-10秒。

14.权利要求10的方法，其中所述微阵列包含固定化在成像表面的不同区域内的许多不同的捕获和查询探针。

15.权利要求14的方法，其中所述方法提供了通过空间分离对实验的并行化。