[发明专利]用于检测猫杯状病毒的引物探针组合物、试剂盒及方法

说明书

本发明属于基因工程技术领域，具体提供了用于检测猫杯状病毒的引物探针组合物、试剂盒及方法。本发明提供的这种以用于检测猫杯状病毒的引物探针组合物作为主要成分的试剂盒耗时短、特异性高、重复性好、灵敏度高，接近现有技术中检测猫杯状病毒的最高水平，为诊断猫杯状病毒提供可靠的实验依据。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及用于检测猫杯状病毒的引物探针组合物、试剂盒及方法。

背景技术

猫杯状病毒(Feline Calicivirus，FCV)属于杯状病毒科疱疹病毒属。猫感染该病毒后，主要表现为上呼吸道症状，部分病例会伴有跛行和全身性疾病。FCV不仅可以感染猫，也可以感染虎、狮等野生猫科动物，是流行于猫科动物中的一种重要病原。FCV的主要传染源是带毒猫和临床康复猫，感染后发病率较高，但是死亡率较低，通常死亡以幼苗为主。近期一些报道认为FCV病毒的致病性呈逐渐增强趋势，FCV强毒变异株不断爆发，不仅会引起上呼吸道疾病，还可引起脾脏、肝脏的病变，更严重的会引起致命的全身性疾病。

目前实验室诊断FCV的方法有病毒分离鉴定、免疫扩散、免疫荧光、PCR、ELISA、电镜镜检等，临床常用的检测方法为RT-PCR。PCR技术因敏感性高、特异性强、费用低等优点已成为一种经典的检测方法，广泛用于猫杯状病毒的检测。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术对猫杯状病毒的检测灵敏毒低的问题。

为此，本发明提供了一种用于检测猫杯状病毒的引物探针组合物，包括：

正向引物，其序列为：5’-TAAGGTTGCTGCAGGTTG-3’；

反向引物，其序列为5’-ACACCATAATGACCAAGGA-3’；

探针，其序列为：5’-ACAATCCTTAGGCCCTTTGCTCAACCCA-3’。

具体的，上述探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

具体的，上述荧光报告基团包括FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas RED或LCRED460中的一种；所述荧光淬灭基团包括BHQ1、BHQ2或BHQ3中的一种。

本发明还提供了一种用于检测猫杯状病毒的试剂盒，包括PCR反应液；所述PCR反应液包括上述任意一项所述的用于检测猫杯状病毒的引物探针组合物。

具体的，上述PCR反应液包括：1-5mM的MgCl₂、20-50mM的Tris、100-500mg/l的BSA、10-100μM的dNTPs、0.1-1μM的正向引物、0.1-1μM的反向引物、0.1-1μM的探针。

具体的，上述用于检测猫杯状病毒的试剂盒还包括酶混合液；所述酶混合液40U/μl的RNA酶抑制剂、25U/μl的逆转录酶和5U/μl的Taq酶。

具体的，上述上述用于检测猫杯状病毒的试剂盒还包括阳性对照和阴性对照；所述阳性对照为合成的猫杯状病毒的假病毒；所述阴性对照为超纯水。

本发明还提供了一种用于检测猫杯状病毒的方法，包括以下步骤：

(1)提取待测样本的DNA；

(2)以待测样本的DNA为模板，进行荧光定量PCR反应，所述PCR反应体系包括上述任意一项所述的用于猫杯状病毒的引物探针组合物；

(3)PCR反应结束后，根据Ct值判定检测结果。

具体的，上述步骤(2)中PCR反应程序为：42℃，15min；95℃，3min，95℃，10s，58℃，20s，40个循环。

与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：