[发明专利]一种节约脐带间充质干细胞培养工序的培养方法

说明书

本申请公开一种节约脐带间充质干细胞培养工序的培养方法，属于生物医药领域，包括：脐带获取；华通氏胶获取；剪碎；铺瓶：用去前段的移液枪枪头将组织块转入到T175细胞培养瓶中，每个培养瓶加入20ml原代培养液，置于培养箱中静置培养；传代或冻存：显微镜下观察每个培养瓶10个组织块爬出细胞，每个集落融合度80％‑90％时进行消化传代或冻存，消化下来的细胞进行计数后，结果未到达冻存要求，按照不少于4000个/cm²密度接种至新的培养瓶中，置于培养箱中静置培养，若计数结果达到冻存要求则按5×10⁶个/ml进行冻存。本发明极大简化了脐带间充质干细胞培养工序，降低了生产成本的同时也保证了细胞质量，另外简单的操作工序也大大降低了因操作导致的污染风险。

技术领域

本申请属于生物医药技术领域，尤其涉及一种节约脐带间充质干细胞培养工 序的培养方法。

背景技术

间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)起源于中胚层，是一类具有 高度自我更新和多向分化潜能的成体干细胞。MSCs根据其本身的特点在血液系 统疾病、心血管疾病、肝硬化、神经系统疾病、自身免疫疾病等方面有广泛的应 用。随着技术和经济的发展，脐带间充质干细胞不仅在疾病方面有重大突破，在 美容抗衰老行业也已经开始应用推广。脐带间充质干细胞数量多，增殖能力强， 基因稳定，免疫原性低、具有免疫调节功能，简单且快速的获取间充质干细胞就 显的尤为重要。

目前现行的脐带间充质干细胞的培养工序是：在剥离脐带华通氏胶后，将其 剪碎并接种至培养瓶中，每个T175培养瓶加入10ml原代培养液，放培养箱培养， 培养至第5天每个培养瓶补加5ml原代培养液,培养至第10天吸弃培养瓶中原有 的培养液，再加入20ml原代培养液继续培养至每个培养瓶约10个组织块爬出细 胞，每个集落融合度约80％-90％时进行消化传代或冻存。

目前的培养工序较繁琐，无形中增加了培养成本，另外频繁的操作，容易增 加样本的污染风险；本发明的工序是目前脐带间充质干细胞培养中关键且必不可 少的工序，本发明在脐带间充质干细胞原代培养中与现行的培养工序相比减少了 补液和换液的步骤，所以说本发明操作简单，节约了大量成本，提高了分离培养 效率，减少了污染风险。

发明内容

本发明的目的在于提供一种节约脐带间充质干细胞培养工序的培养方法。本 方法经实践验证操作方便且可靠、细胞得率高、质量好且稳定，适于推广应用。

为达到上述目的，本发明所采用的技术方案如下：

本发明使用具备知情同意书和体检报告等来源清晰的脐带，规避了遗传性疾 病和传染性疾病带来的可能导致原代获取失败的风险。

一种节约脐带间充质干细胞培养工序的培养方法，具体包括如下步骤：

(1)脐带获取；

(2)华通氏胶获取；

(3)剪碎：将剥离的华通氏胶剪成1～3mm³的组织块；

(4)铺瓶：将移液枪枪头前段剪断，用去前段的移液枪枪头将组织块转入 到T175细胞培养瓶中，每个培养瓶加入20ml原代培养液，置于培养箱中静置培 养；

(5)传代或冻存：显微镜下观察每个培养瓶约10个组织块爬出细胞，每个 集落融合度80％-90％时进行消化传代或冻存，消化下来的细胞进行计数后，结果 未到达冻存要求，按照不少于4000个/cm²密度接种至新的培养瓶中，置于培养 箱中静置培养，若计数结果达到冻存要求则按5×10⁶个/ml进行冻存。

优选的，步骤(1)中，脐带获取步骤：获取脐带后，首先应剪去质量不 好的部分并进行多次洗涤。

优选的，步骤(2)中，华通氏胶获取步骤：需要先剥离脐带中的1根静脉 和2根动脉，其目的是提高脐带间充质干细胞纯度。