[发明专利]一种高产α-蛇麻烯的酵母重组菌株的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种重组热带假丝酵母H-11，其特征在于，以热带假丝酵母CU-206为宿主，将ZSS1和ERG20基因整合表达盒POX5-gda324-URA3-PFBA1-ZSS1-TADH2-T7syn-ERG20-PGAP1-POX5转化进入热带假丝酵母CU-206，在POX5位点整合两个拷贝的ZSS1和ERG20基因，获得产α-蛇麻烯酵母菌株H-03；缺失H-03中的标记基因URA3，获得尿嘧啶缺陷型菌株H-04；将线性化的ERG8、ERG19、ERG12和IDI1基因整合表达盒ALD1-gda324-URA3-TENO1-IDI1-PGAP1-PFBA1-ERG19-TADH2-T7syn-ERG8-PGAP1-PFBA1-ERG12-TPGK1-ALD1，ERG10、ERG13和tHMGR基因整合表达盒FAO1-gda324-URA3-TENO1-ERG10-PGAP1-T7syn-tHMGR-PGAP1-PFBA1-ERG13-TPGK1-FAO1依次转化进入热带假丝酵母H-04，在ALD1位点整合两个拷贝的ERG8、ERG19、ERG12和IDI1基因，获得菌株H-05；菌株H-05丢失URA3后获得H-06；然后将ERG10、ERG13和tHMGR基因整合表达盒转化H-06，获得产α-蛇麻烯酵母菌株H-07；H-07丢失URA3后获得尿嘧啶缺陷项菌株H-08；将线性化的ZSS1和ERG20基因整合表达盒DLD1-1-gda324-URA3-P_FBA1-ZSS1-T_ADH2-T_7syn-ERG20-PGAP1-DLD1-1，ERG10与NADH-HMGR基因整合表达盒DLD1-2-gda324-URA3--T_ENO1-ERG10-PGAP1-P_FBA1-NADH-HMGR-T_PGK1-DLD1-2以及ZSS1表达盒LPP2-gda324-URA3-P_FBA1-ZSS1-T_ADH2-T_7syn-ZSS1-PGAP1-LPP2依次转化进入热带假丝酵母H-08，获得所述重组热带假丝酵母H-11；

所述蛇麻烯合酶基因ZSS1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述HMG-CoA还原酶基因NADH-HMGR的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述乙酰辅酶A硫解酶基因ERG10的genebank登录号为：D13470.1，所述HMG-CoA合成酶基因ERG13的genebank 登录号为：RCK66100.1，所述截短的HMG-CoA还原酶基因tHMGR的genebank登录号为：RCK56388.1，所述甲羟戊酸激酶基因ERG12的genebank 登录号为：RCK63831.1，所述磷酸甲羟戊酸激酶基因ERG8的genebank 登录号为：RCK59297.1，所述二磷酸甲羟戊酸激酶基因ERG19的genebank登录号为：RCK60630.1，所述异戊烯基焦磷酸异构酶基因IDI1的genebank登录号为：RCK59267.1，所述香叶基/法尼基焦磷酸合酶基因ERG20的genebank 登录号为：RCK67668.1。

2. 一种制备α-蛇麻烯的方法，其特征在于，所述方法为，将权利要求 1所述的重组热带假丝酵母H-11添加至发酵培养基中，发酵制备得到α-蛇麻烯。

3. 权利要求 1所述的重组热带假丝酵母H-11在制备α-蛇麻烯或含有α-蛇麻烯的产品中的应用。