[发明专利]一种非侵入性快速确定植物是否感染番茄黄化曲叶病毒的方法

权利要求书

1.一种用于检测番茄黄化曲叶病毒的微滴式数字PCR的特异性引物，其特征在于，所述特异性引物的核苷酸序列如下所示：

5’-CCGAAAGCCCAGAATATACAGA-3’(SEQ ID NO.1)，

5’-CCAGATCCACGAGTAACATCAC-3’(SEQ ID NO.2)。

2.一种用于检测番茄黄化曲叶病毒的微滴式数字PCR的特异性探针，其特征在于，所述特异性探针的核苷酸序列如下所示：

5’-CCCATGTAAAGTCCAGTCTTATGAGCAACG-3’(SEQ ID NO.3)。

3.根据权利要求2所述的用于检测番茄黄化曲叶病毒的微滴式数字PCR的特异性探针，其特征在于，所述特异性探针的5’端标记有荧光基团，探针的3’端标记有淬灭基团；

所述荧光基团为FAM、TET、HEX、CY3或JOE中的一种；

所述淬灭基团为BHQ1、BHQ2、TAMRA、MGB或DABCYL中的一种。

4.一种用于检测番茄黄化曲叶病毒的工具，其特征在于，包括权利要求1所述的引物和/或权利要求2-3任一项所述的探针。

5.一种定量检测番茄黄化曲叶病毒的试剂盒，其特征在于，包括权利要求4所述的检测工具。

6.一种非侵入性快速确定植物是否感染番茄黄化曲叶病毒的方法，其特征在于，

使用权利要求1所述的特异性引物和权利要求2或3所述的特异性探针进行检测确认；

或

使用权利要求4所述的用于检测番茄黄化曲叶病毒的工具进行检测确认；

或

使用权利要求5所述的试剂盒进行检测确认。

7.根据权利要求6所述的非侵入性快速确定植物是否感染番茄黄化曲叶病毒的方法，其特征在于，被检测物为从媒介昆虫分泌的蜜露中提取的DNA。

8.根据权利要求7所述的非侵入性快速确定植物是否感染番茄黄化曲叶病毒的方法，其特征在于，所述媒介昆虫为烟粉虱。

9.根据权利要求8所述的非侵入性快速确定植物是否感染番茄黄化曲叶病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)使用沾有缓冲液ASL的棉签收集植物叶片上的烟粉虱蜜露并从蜜露中提取DNA；

(2)以步骤(1)提取的DNA为模板，加入序列为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的引物和序列为SEQ ID NO.3的探针，以及2×ddPCR Super Mix For Probes和RNase free water，配置得到反应体系；

(3)将步骤(2)配制得到的体系和微滴生成油加入微滴发生卡中，置于微滴发生器中生成微滴；

(4)将步骤(3)中生成的微滴转移至ddPCR 96孔板进行扩增反应，反应结束后进行微滴荧光数据分析；

(5)对数据结果进行分析，通过copies/μL计算样品中含有的拷贝数从而得到收集样品是否感染TYLCV，当阳性液滴数大于5个时即可判断样品感染TYLCV。

10.根据权利要求9所述的非侵入性快速确定植物是否感染番茄黄化曲叶病毒的方法，其特征在于，所述的植物包括番茄、辣椒、茄子。