[发明专利]与冷冻精子质量或其所形成胚胎发育相关microRNA标志物及其应用

权利要求书

1.一种与冷冻精子质量相关或使用冷冻精子受精后胚胎发育相关的microRNA标志物，其特征在于，所述microRNA标志物选自miR-30b-5p、miR-148b-3p和miR-140-5p中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述microRNA标志物，其特征在于，所述miR-30b-5p的序列如SEQ IDNO.1所示；

所述miR-148b-3p的序列如SEQ ID NO.2所示；

所述miR-140-5p的序列如SEQ ID NO.3所示。

3.权利要求1或2所述microRNA标志物在冷冻精子质量评估、使用冷冻精子受精后胚胎发育潜能预测或精子冷冻保护液开发的试剂或试剂盒中的应用。

4.一种冷冻精子质量评估试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述microRNA标志物的引物；

所述microRNA标志物选自miR-30b-5p、miR-148b-3p和miR-140-5p中的一种或多种。

5.根据权利要求4所述的冷冻精子质量评估试剂盒，其特征在于，所述miR-140-5p的引物序列为SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6；

所述miR-148b-3p的引物序列为SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9；

所述miR-30b-5p的引物序列为SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12。

6.一种使用冷冻精子受精后胚胎发育潜能预测试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述microRNA标志物的引物；

所述microRNA标志物选自miR-30b-5p、miR-148b-3p和miR-140-5p中的一种或多种。

7.根据权利要求6所述胚胎发育潜能预测试剂盒，其特征在于，所述miR-140-5p的引物序列为SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6；

所述miR-148b-3p的引物序列为SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9；

所述miR-30b-5p的引物序列为SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12。

8.一种精子冷冻保护液的辅助开发试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述microRNA标志物的引物；

所述microRNA标志物选自miR-30b-5p、miR-148b-3p和miR-140-5p中的一种或多种。

9.根据权利要求8所述精子冷冻保护液的辅助开发试剂盒，其特征在于，所述miR-140-5p的引物序列为SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6；

所述miR-148b-3p的引物序列为SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9；

所述miR-30b-5p的引物序列为SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12。

10.一种评估冷冻精子的质量及其后续所形成胚胎发育潜能的方法，其特征在于，通过检测冷冻精子中miR-30b-5p、miR-148b-3p或miR-140-5p的表达进行评估；

优选地，所述方法以新鲜精子中miR-30b-5p、miR-148b-3p或miR-140-5p的表达作为对照组；

优选地，与对照组相比，冷冻精子的miR-148b-3p表达显著下调和/或miR-30b-5p表达显著下调和/或miR-140-5p表达显著增加，表明冷冻精子的质量及其后续所形成胚胎的发育潜能差；

优选地，采用权利要求6或8所述试剂盒的引物序列，通过RT-qPCR检测冷冻精子中miR-30b-5p、miR-148b-3p或miR-140-5p的表达；

优选地，所述RT-qPCR以U6基因作为内参。