[发明专利]AFP检测用双酶共载纳米球及其制备方法、AFP检测方法

权利要求书

1.一种甲胎蛋白AFP检测用双酶共载纳米球，其特征在于，所述纳米球包括：核-壳结构磁性介孔二氧化硅纳米球，以及分布于介孔孔道中的葡萄糖氧化酶GoD和辣根过氧化物酶HRP；其中，

所述核-壳结构具有磁性内核颗粒和分布有介孔孔道的二氧化硅壳结构；所述磁性内核颗粒用于通过磁性分离作用富集血清样本中的AFP；所述葡萄糖氧化酶GoD和辣根过氧化物酶HRP用于催化底物显色。

2. 根据权利要求1所述的甲胎蛋白AFP检测用双酶共载纳米球，其特征在于，所述磁性内核颗粒粒径为230-250nm，所述分布有介孔孔道的二氧化硅球形壳结构层的厚度为50-200 nm。

3.根据权利要求1所述的甲胎蛋白AFP检测用双酶共载纳米球，其特征在于，所述GoD和HRP的投料比为1:1。

4.一种甲胎蛋白AFP检测用双酶共载纳米球的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤S101，将三氯化铁、柠檬酸三钠和乙酸钠溶解于乙二醇中，通过溶剂热法合成230-250 nm的Fe₃O₄磁性纳米粒子；

步骤S102，采用界面共组装法在磁性纳米粒子外制备介孔二氧化硅壳结构层；具体地，将所述Fe₃O₄磁性纳米粒子分散在乙醇-水的混合溶液中，以正硅酸四乙酯TEOS为硅源、十六烷基三甲基溴化铵CTAB为模板剂、有机试剂为扩孔剂、碱性试剂为催化剂，在机械搅拌条件下水浴反应得到核-壳结构的磁性介孔二氧化硅纳米球；

步骤S103，采用共价偶联法将葡萄糖氧化酶GoD和辣根过氧化物酶HRP偶联到壳结构层的介孔孔道中。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S102中，采用环氧基团对所述磁性介孔二氧化硅纳米球进行修改，具体过程如下：用3-（2,3-环氧丙烷）丙基三甲氧基硅烷修饰核-壳结构磁性介孔二氧化硅纳米球，得到环氧基团功能化的核-壳结构磁性大孔介孔二氧化硅纳米球。

6.一种用于甲胎蛋白AFP检测的探针，其特征在于，所述探针包括权利要求1-3任一项所述纳米球，以及偶联于纳米球上的AFP捕获抗体。

7.根据权利要求6所述的用于甲胎蛋白AFP检测的探针，其特征在于，所述AFP捕获抗体在探针中的含量以质量分数计为1‰。

8.一种AFP检测用的酶联免疫吸附测定ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求6或7所述的探针、AFP检测抗体包被的酶标板、工作液、葡萄糖溶液、显色底物、终止液和洗涤液。

9.一种采用权利要求8所述的ELISA试剂盒的AFP检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤S201，通过探针搭载的双酶共载纳米球上的葡萄糖氧化酶GoD和辣根过氧化物酶HRP催化ELISA试剂盒中的显色底物氧化显色；

步骤S202，用终止液终止显色，读取显色信号。

10.根据权利要求9所述的AFP检测方法，其特征在于，所述步骤S201氧化显色过程具体包括：将探针用工作液稀释，与待检血清样本混合后加入到AFP检测抗体包被的酶标板中，孵育1-3 h，用洗涤液洗涤后，加入葡萄糖溶液；利用GoD催化葡萄糖氧化产生过氧化氢H₂O₂，再通过HRP催化H₂O₂氧化显色底物产生信号，再加入终止液后，通过颜色信号判读AFP含量。