[发明专利]一种岩藻糖糖蛋白荧光显色载体的制备方法、荧光强度参考载体的制作方法及用途

说明书

本发明公开了一种岩藻糖糖蛋白荧光显色载体的制备方法，包括步骤：在载体表面共价结合凝集素；对体液糖蛋白提取并用荧光标记糖蛋白；将荧光标记的糖蛋白与固定有凝集素的载体结合，在其表面形成凝集素与岩藻糖的亲和结合。该方法还能够用于制作荧光强度参考载体，并用于肺癌的诊断。

技术领域

本发明属于生物分子分析试剂技术领域，具体涉及岩藻糖糖蛋白荧光显色载体的制备方法、荧光强度参考载体的制作方法及用途。

背景技术

肺癌是全球癌症病人死亡的主要原因，每年有180万人死于肺癌，占所有癌症死亡人数的25％。肺癌高死亡率通常是由于在确诊时，病人已处于癌症晚期，这是因为肺癌在其肿瘤扩散之前是没有任何症状的，以致于难以察觉。肺癌的晚期确诊会大大降低患者生存机会，并增加医疗费用。统计表明非小细胞肺癌(NSCLC)患者，如果癌症仅在单个肺的局部区域，5年生存率大约为60％；如果癌症已扩散到肺外或淋巴结(区域性肺癌)，5年生存率降至33％；如果癌症已经发生移动，即癌转移至肺及更远的器官包括大脑、骨骼等，5年生存率只有6％。因此早期诊断是提高生存率和降低医疗费用最有效的手段之一。目前检测肺癌的方法包括胸部X射线(CXR)、计算机断层扫描(CT)、磁共振成像(MRI)、正电子发射断层扫描(PET)、痰液分析和肺活检。尽管目前的技术和癌症研究已大有进步，但是仍有57％的肺癌患者是在肿瘤转移到不同器官后才被诊断出来。

因此，有必要研发一种岩藻糖糖蛋白荧光显色载体的制备方法、荧光强度参考载体的制作方法及用途来解决现有早期肺癌筛查技术中对绝大多数肺癌难以确诊、早期无症状造成确诊癌症已属于晚期而无法治疗的问题。

发明内容

本发明目的是提供一种岩藻糖糖蛋白荧光显色载体的制备方法、荧光强度参考载体的制作方法及用途。

本发明的一种技术方案是：

一种岩藻糖糖蛋白荧光显色载体的制备方法，包括步骤：

1)在载体表面共价结合凝集素；

2)对体液糖蛋白提取并用荧光标记糖蛋白；

3)将荧光标记的糖蛋白与固定有凝集素的载体结合，在其表面形成凝集素与岩藻糖的亲和结合。

进一步的，在步骤1)中，所述在载体表面共价结合凝集素包括：

将载体浸入含有氧化剂的缓冲溶液中，在室温下反应，使得所述载体上的葡萄糖中的邻位二羟基被氧化形成两个醛基；

将所述载体取出，浸泡在NaCl溶液中振荡清洗，取出后再浸泡在去离子水中振荡清洗，最后将所述载体取出；

将所述载体在含有凝集素的PBS溶液中反应；

在所述含有凝集素的PBS溶液中加入氰基硼氢化钠，轻微振荡，室温反应得到凝集素载体；

将所述凝集素载体依次浸入NaCl溶液、ACN溶液和去离子水中清洗，获得表面具有岩藻糖凝集素的载体。

进一步的，所述载体为试纸或球状树脂，当选择所述试纸作为载体时，所述试纸具有纤维素，当选择所述球状树脂作为载体时，所述球状树脂具有醛基。

进一步的，所述氧化剂为高碘酸钠，所述氧化剂在所述缓冲溶液中的浓度为5-20mM，所述缓冲溶液为90-100mM的醋酸钠。

进一步的，所述凝集素为LCA、UEAI或AAL中的任意一种或多种。

进一步的，在步骤2)中，所述对体液糖蛋白提取并用荧光标记糖蛋白包括步骤：

采集体液，并放置于离心管内；

在所述体液中加入乙醇，通过沉淀法提取所述体液中的蛋白质；

将所述蛋白质重新溶解于二异丙基乙胺中，并混合均匀，获得样本；