[发明专利]一种双平台联用的外周血cfDNA碱基突变和甲基化检测的方法

权利要求书

1.一种双平台联用的外周血cfDNA碱基突变和甲基化检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、处理外周血样品得到含有cfDNA片段化核酸的混合物；

S2、通过末端修复和连接反应在所述cfDNA片段化核酸的末端连接Y型接头；得到连接有所述Y型接头的cfDNA片段化核酸组成的文库；所述Y型接头包括标签序列、酶切位点、Illumina因美纳平台测序引物序列和flow cell结合序列；

S3、取一部分连接有所述Y型接头的片段化核酸组成的文库，进行Illumina因美纳平台测序，检测核酸突变位点；

S4、取剩余连接有所述Y型接头的片段化核酸组成的文库，进行酶切处理产生粘性末端接头；

S5、对上述已完成酶切的文库进行纯化，纯化后直接进行粘性末端的连接；

S6、控制连接反应条件形成具有三代测序读长的连接产物，经纯化分选，得到符合纳米孔测序质控标准的长串联核酸片段，然后进行纳米孔建库和测序，所述长串联核酸片段包含线性连接的cfDNA片段化核酸序列和位于各cfDNA片段化核酸序列至少一个末端的Y型接头，所述cfDNA片段化核酸序列之间通过所述Y型接头连接。

2.如权利要求1所述的一种双平台联用的外周血cfDNA碱基突变和甲基化检测的方法，其特征在于：所述Y型接头在配对的5’端添加了磷酸基团修饰。

3.如权利要求2所述的一种双平台联用的外周血cfDNA碱基突变和甲基化检测的方法，其特征在于：所述步骤S4中，酶切处理使用的内切酶与Y型接头上的酶切位点相一致。

4.如权利要求1所述的一种双平台联用的外周血cfDNA碱基突变和甲基化检测的方法，其特征在于：所述Y型接头的长度为70~85bp。

5.如权利要求1所述的一种双平台联用的外周血cfDNA碱基突变和甲基化检测的方法，其特征在于：所述步骤S3中的Illumina因美纳平台测序可以是直接测序、扩增后测序或是针对特殊片段完成捕获后测序中一种。

6.如权利要求1所述的一种双平台联用的外周血cfDNA碱基突变和甲基化检测的方法，其特征在于：所述步骤3中取1/4的连接有所述Y型接头的片段化核酸组成的文库，所述步骤4中3/4的连接有所述Y型接头的片段化核酸组成的文库。

7.如权利要求1所述的一种双平台联用的外周血cfDNA碱基突变和甲基化检测的方法，其特征在于：所述步骤S6中cfDNA片段化核酸序列的长度为140~180bp，所述串联核酸片段的长度为1kb-3kb。

8.如权利要求1所述的一种双平台联用的外周血cfDNA碱基突变和甲基化检测的方法，其特征在于：所述步骤S6中cfDNA片段化核酸序列是来源于相同或不同外周血cfDNA的片段化核酸。