[发明专利]甲型流感、乙型流感和呼吸道合胞病毒的多重富集检测方法

权利要求书

1.一种甲型流感、乙型流感和呼吸道合胞病毒的非诊断或治疗目的的多重富集检测方法，其特征在于具体包括如下步骤：

S1、免疫磁珠的制备：将甲型流感、乙型流感和呼吸道合胞病毒三种抗体分别偶联至羧基修饰的超顺纳米磁珠上，得到三种偶联病毒抗体的免疫磁珠，

S2、病毒的富集：将甲型流感病毒阳性或乙型流感病毒阳性或呼吸道合胞病毒阳性的样本保存液，与三种偶联病毒抗体的免疫磁珠混合孵育；

S3、用磁性工具分离免疫磁珠-病毒复合物，将免疫磁珠-病毒复合物重悬于TE缓冲液中加热裂解；

S4、用磁性工具分离磁珠，得到富集浓缩的病毒，用多重荧光PCR试剂对裂解产物中的液体直接进行检测，所述荧光PCR试剂包含以下引物探针：

2.根据权利要求1所述的多重富集检测方法，其特征在于，所述免疫磁珠所偶联的病毒抗体为指甲型流感病毒神经氨酸酶(NA)抗体、乙型流感病毒神经氨酸酶(NA)抗体、呼吸道合胞病毒F蛋白抗体，是单克隆抗体或多克隆抗体。

3.根据权利要求1所述的多重富集检测方法，其特征在于，步骤S2所述病毒的富集具体方法为：取样本保存液200μL与三种偶联病毒抗体的免疫磁珠各5μL混合，室温下(25-37℃)混匀6-15分钟；

步骤S3所述的加热裂解是：在85-95℃加热5-15分钟裂解病毒释放核酸。

4.根据权利要求1所述的多重富集检测方法，其特征在于，所述荧光PCR试剂还包含以下内标的引物探针：

5.根据权利要求1所述的多重富集检测方法，其特征在于，步骤S4所述荧光PCR试剂(15μL)包含以下组分：

组份	序列号	母液浓度	每人份用量(μL)
IFA F	SEQ ID No:1	100uM	0.12
IFA F1	SEQ ID No:2	100uM	0.12
IFA R	SEQ ID No:3	100uM	0.12
IFA P	SEQ ID No:4	100uM	0.045
IFB F	SEQ ID No:5	100uM	0.12
IFB R	SEQ ID No:6	100uM	0.12
IFB P	SEQ ID No:7	100uM	0.045
RSVA F	SEQ ID No:8	100uM	0.10
RSVA R	SEQ ID No:9	100uM	0.10
RSVA P	SEQ ID No:10	100uM	0.08
RSVB F	SEQ ID No:11	100uM	0.10
RSVB R	SEQ ID No:12	100uM	0.10
RSVB P	SEQ ID No:13	100uM	0.06
IC F	SEQ ID No:14	100uM	0.015
IC R	SEQ ID No:15	100uM	0.015
IC P	SEQ ID No:16	100uM	0.015
纯化水		/	8.125
合计			9.4

。