[发明专利]蛋白酶体在提高体外受精成功率中的应用

权利要求书

1.蛋白酶体在提高体外受精成功率中的应用，其特征在于，所述体外受精成功率与精子蛋白酶体活性正相关，相关系数r＝0.4499；精子蛋白酶体活性高，可以显著提高体外受精成功率和体外受精2PN率。

2.蛋白酶体活性在评估体外受精成功率中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述体外受精成功率以精子中蛋白酶体活性为评价指标；所述蛋白酶体活性的测定，包括以下步骤：

(1)收集新鲜精液标本，采用梯度离心法处理所述精液标本，分离得到精子标本；

(2)将所述精子标本混匀，用PBS溶液将所述精子标本稀释并计数，再取稀释后计数为2-10⁶/mL的精子标本与蛋白酶体检测试剂混合均匀；

(3)将标准品20S proteasome试剂按照比例稀释，并将稀释后的20S proteasome与蛋白酶体检测试剂混合均匀；

(4)经步骤(2)处理后的混合液以及经步骤(3)处理后的标准品分别用多功能酶标仪检测精子和标准品中蛋白酶体荧光强度；

(5)根据所述标准品的荧光强度值制作标准曲线，并根据所述标准曲线所得公式计算精子标本中蛋白酶体活性。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤(1)中，梯度离心法处理精液标本具体包括以下步骤：

S1：将已液化的精液加入梯度分离液顶部，于300-400g离心10-20min，收集底层精子沉淀；

S2：将所述精子沉淀加入Fertilization Medium培养液中，充分混匀后，300-400g离心3-8min；

S3：经S2离心后弃去上清液，加入Fertilization Medium培养液调整精子浓度至20×10⁶/mL，于6％CO₂、37℃培养，备用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，经过梯度离心法处理精液标本后，精子活力平均值为90.8±8.81％。

6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤(2)中，稀释后计数为2-10⁶/mL的精子标本与蛋白酶体检测试剂按照等体积比混合。

7.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤(3)中，所述标准品20S proteasome试剂按照比例稀释后分别为2500ng/ml、100ng/ml、500ng/ml、250ng/ml、125ng/ml。

8.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤(4)中，测定荧光强度的激发波长为380nm，发射波长为460nm。

9.一种检测蛋白酶体活性的试剂在制备评估体外受精成功率的试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂盒包括用于检测蛋白酶体活性，通过所述蛋白酶体活性评估体外受精成功率。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括蛋白酶体缓冲液、荧光素检测试剂、Suc-LLVY-Glo^TM底物以及20S Proteasome标准品。