[发明专利]一种西瓜小对叶组培一步成苗培养基及一步成苗方法

说明书

本发明涉及植物培养技术领域，具体涉及一种西瓜小对叶组培一步成苗培养基及一步成苗方法。培养基包括如下组分：基本培养基、6‑苄氨基嘌呤(6‑BA)、1‑萘乙酸(NAA)、小球藻生长因子。本发明采用含有小球藻生长因子的培养基对西瓜小对叶组培一步成苗，可以促进无菌外植体继代苗茎叶生长，提高增殖系数，长势良好，缩短育苗周期。

技术领域

本发明涉及植物培养技术领域，具体涉及一种西瓜小对叶组培一步成苗培养基及一步成苗方法。

背景技术

西瓜小对叶(Bacopa monnieri)，分布于非洲、亚洲、澳洲、美国等热带或亚热带地区，茎为绿色至咖啡色变化，茎节上会长出十字对生的卵形叶，卵形叶为深绿色，且叶质地较厚属于挺水性类中后景类水草水草。其常见的繁殖方式为侧芽插枝方式，这些常规的繁殖方法繁殖系数低，培养周期较长，而且不易获得大量的植株。采用组织培养的方式可以快速繁殖种苗，且繁殖的种苗具有不带病毒、生长一致等优点，从而使种苗生产达到规模化、标准化和工厂化的目标。

小球藻(Chlorella)是一种常见的单细胞绿藻，是产业化生产的主要微藻种类，拥有重要经济价值和巨大的开发前景。小球藻每20h能增殖4倍，主要是由于小球藻的生长因子决定的。小球藻生长因子(Chlorella Growth Factor)简写CGF，它可以促进小球藻细胞的生长、分裂和繁殖，是小球藻的独有细胞内生物活性成分。包括多糖、多肽、蛋白质、维生素、植物激素等，被称为“类荷尔蒙”。有实验表明，适宜浓度的小球藻生长因子提取物能显著地促进几种蔬菜种子的萌发。将小球藻提取物液稀释后喷洒在果蔬叶片上能以增强光合作用并促进根系生长，并已在实验室和大田种植方面获得了广泛的研究。以西瓜小对叶为研究对象，探讨小球藻活性提取物对西瓜小对叶组培苗组培快繁的影响，为小球藻生长因子在西瓜小对叶组织培养中的推广应用提供新的思路。

发明内容

针对现有技术的西瓜小对叶繁殖周期长等问题，本发明提供一种西瓜小对叶组培一步成苗培养基及一步成苗方法，采用含小球藻生长因子的培养基培养可促进西瓜小对叶组培苗生长，缩短繁殖周期。

第一方面，本发明提供一种西瓜小对叶组培一步成苗培养基，包括如下组分：基本培养基、6-苄氨基嘌呤(6-BA)、1-萘乙酸(NAA)、小球藻生长因子。

进一步的，基本培养基为1/2MS培养基。

进一步的，6-苄氨基嘌呤在培养基中的浓度为0.2mg/L，1-萘乙酸在培养基中的浓度为0.1mg/L，小球藻生长因子在培养基中的体积浓度为1％-5％。

进一步的，小球藻生长因子的制备方法如下：

(1)按1：10比例接种蛋白核小球藻至锥形瓶中，所用的培养基为BG11培养基，28℃光照连续培养，每天在显微镜下血球板计数，直至达到密度≥10⁷CFU/ml；

(2)取生长状态良好的藻液20ml在4000r/min离心10min，收集藻泥沉淀，弃去上清，用无菌水离心洗涤沉淀；

(3)沉淀用无菌水100ml稀释置于高压锅中，120℃加热萃取20min，取出后在室温下自然冷却，过滤沉淀留上清液，得到含小球藻生长因子的提取液。

进一步的，步骤(2)藻液中血球板计数为3.5×10⁷个/ml。

第二方面，本发明提供西瓜小对叶组培一步成苗方法，具体为：将西瓜小对叶外植体接种到权利要求1所述的一步成苗培养基上进行增殖培养。

进一步的，西瓜小对叶外植体通过以下方法得到：选用0.5-1cm的茎段，用洗洁精水浸泡10-15min，流水下冲洗，然后在超净工作台上用75％酒精消毒15s，再用0.1％HgCl₂表面灭菌2.5min，无菌水冲洗4-5次，即得。