[发明专利]miRNA-140的应用及调控斑马鱼颅面骨骼和鳞片发育的方法在审
| 申请号： | 202111535585.3 | 申请日： | 2021-12-15 |
| 公开（公告）号： | CN115851828A | 公开（公告）日： | 2023-03-28 |
| 发明（设计）人： | 许强华;陈良标;张智聪;季冯钰 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/113;C12N15/55;C12N15/11;C12Q1/6888;A01K67/027 |
| 代理公司： | 上海唯智赢专利代理事务所(普通合伙) 31293 | 代理人： | 吴瑾瑜 |
| 地址： | 201306 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | mirna 140 应用 调控 斑马 鱼颅面 骨骼 鳞片 发育 方法 | ||
1.miRNA-140在调控斑马鱼颅面骨发育或鳞片发育方面的应用。
2.调控斑马鱼颅面骨发育或鳞片发育的方法，其特征在于，敲除斑马鱼的miRNA-140基因、降低miRNA-140基因的表达或者增强miRNA-140基因的表达。
3.构建颅面和鳞片发育异常的斑马鱼模型的方法，其特征在于，敲除斑马鱼的miRNA-140基因。
4.根据权利要求4所述构建颅面和鳞片发育异常的斑马鱼模型的方法，其特征在于，步骤包括：
(1)敲除斑马鱼的一细胞期受精卵中的miRNA-40基因，获得miR-140基因敲除的斑马鱼杂合子F0代；
(2)将F0代与AB型野生斑马鱼杂交获得F1代，经基因测序，获得miR-140基因缺失的杂合子；
(3)将成熟F1代miR-140基因缺失型雌、雄杂合子进行内交得F2代，获得F2代miR-140基因缺失的雌雄性纯合子斑马鱼。
5.根据权利要求4所述构建颅面和鳞片发育异常的斑马鱼模型的方法，其特征在于，还包括步骤(4)：将F2代miR-140基因缺失的雌雄性纯合子斑马鱼交配产生F3代，纯合子斑马鱼。
6.敲除斑马鱼miRNA-140基因的方法，其特征在于，敲除SEQ ID No.1中第217-513长度为297bp的核苷酸序列，包括以下步骤：将Cas9和上下游gRNA注射入斑马鱼的一细胞期受精卵。
7.根据权利要求6所述敲除斑马鱼miRNA-140基因的方法，其特征在于，所述上下游gRNA通过以下步骤制备：
(A)以如SEQ ID No.6和SEQ ID No.7所示的寡核苷酸序列、sgRNA骨架序列为模板，扩增获得gRNA体外转录模板；
(B)根据gRNA体外转录模板，进行T7启动子的体外转录，获得上下游gRNA。
8.用于鉴定斑马鱼miRNA-140基因表型的引物，其特征在于，上下游引物序列如SEQ IDNo.4和SEQ ID No.5所示。
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