[发明专利]一种HSP/SAA重组蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种HSP/SAA重组蛋白及其制备方法和应用。所述HSP/SAA重组蛋白是由HSP基因与SAA基因通过BglII/BamHI同尾酶连接而成的。本发明将融合蛋白HSP以及SAA进行基因优化后，将其插入原核表达载体pET‑28a中，使两者融合表达，并且SAA表达高效，其表达水平占全菌总蛋白的25％，且表达形式为可溶性蛋白，达到了大量制备诊断用SAA蛋白的目的，且HSP/SAA重组蛋白稳定性好，有利于SAA在各种诊断试剂中的应用和制备。

技术领域

本发明属于生物分子学领域，具体涉及一种HSP/SAA重组蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A protein，SAA)属于载脂蛋白家族中的异质类蛋白质，分子量12000Da，是一种由肝细胞产生后被分泌到血清中的急性时相蛋白。当机体发生感染或损伤时，4-6小时内迅速升高约1000倍，当机体抗原清除后则迅速降至正常水平，所以SAA是诊断病毒、细菌感染的敏感性指标。SAA还可以作为各类检测特异性抗体的诊断试剂的原料。但由于SAA分子量较小，在重组表达过程中稳定性差，易降解，易造成总体表达水平不高，最终导致其产量低，不利于SAA的表达使用。

发明内容

为了克服现有技术中的问题，本发明提供了一种HSP/SAA重组蛋白及其制备方法和应用，利用SAA与HSP65的融合表达，达到大量制备诊断用SAA蛋白的目的。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明提供了一种HSP/SAA重组蛋白，所述HSP/SAA重组蛋白是由HSP基因与SAA基因通过BglII/BamHI同尾酶连接而成的。

进一步的，所述HSP/SAA重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示，其编码基因HSP+SAA/28a基因的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

进一步的，所述HSP基因为HSP65基因，来源于结核分枝杆菌，其核苷酸序列如SEQID No.1所示，其编码的HSP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

进一步的，利用所述SAA基因与pET-28a载体合成SAA/pET-28a基因后进行同尾酶连接；所述SAA/pET-28a基因的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

本发明还提供了所述的HSP/SAA重组蛋白的制备方法，包括以下步骤：

(1)从结核分枝杆菌中提取HSP65基因，扩增、回收后进行酶切；

(2)利用SAA基因与pET-28a载体合成SAA/pET-28a基因后进行酶切；

(3)将步骤(1)和步骤(2)中的酶切产物通过BglII/BamHI同尾酶连接至载体pET-28a，再转化感受态细胞，培养后，挑选单克隆抗体鉴定；

(4)鉴定为阳性的单克隆抗体再次转化感受态细胞，挑选单菌落加入培养基中培养，电泳鉴定有明显表达带，则得到HSP/SAA重组蛋白。

进一步的，所述步骤(1)中扩增的引物为：

F：5'-aaggaaaaaagcggccgcgccaagacaattgcgtacg-3'；

R：5'-tccagatctgaaatccatgccacccatgtc-3'。

进一步的，所述步骤(3)中连接体系为HSP65基因2μl；SAA基因4μl；pET-28a载体2μl；Solution I 8μl。

进一步的，所述步骤(4)中明显表达带的分子量为70kD。

本发明还提供了所述的HSP/SAA重组蛋白在用于制备SAA诊断试剂中的应用。