[发明专利]一种GLP-1(1-37)多肽的合成方法

说明书

本发明涉及一种GLP‑1(1‑37)多肽的合成方法，属于多肽药物合成技术领域，包括以下步骤：以Rink‑Resin为载体树脂，在添加活化剂和缩合剂的条件下，使载体树脂和酪氨酸偶联得到Fmoc‑Tyr(tBu)‑Rink‑Resin；通过固相合成法，根据GLP‑1(1‑37)的氨基酸序列依次偶联其它氨基酸；脱除保护基和裂解载体树脂后，得到GLP‑1(1‑37)粗肽；纯化、转盐、冻干，得到GLP‑1(1‑37)多肽。该方法合成周期短，成本低，后处理容易，副产物少，产品收率高，利于GLP‑1(1‑37)的大规模生产，具有可观的经济适用价值和广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于多肽药物合成技术领域，具体地，涉及一种GLP-1(1-37)多肽的合成方法。

背景技术

肠促胰素是人体内一种肠源性激素，肠促胰素以葡萄糖浓度依赖性方式促进胰岛β细胞分泌胰岛素，并减少胰岛α细胞分泌胰高血糖素(glucagon)，从而降低血糖。正常人在进餐后，肠促胰素开始分泌，进而促进胰岛素分泌，以减少餐后血糖的波动。但对于2型糖尿病患者，其“肠促胰素效应”受损，主要表现为进餐后胰高血糖素样肽-1(GLP-1)浓度升高幅度较正常人有所减小，但其促进胰岛素分泌以及降血糖的作用并无明显受损，因此GLP-1及其类似物可以作为2型糖尿病治疗的一个重要靶点。

GLP-1(1-37)多肽为GLP-1多肽的一种，其氨基酸序列缩写为：

Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Leu-Val-His-Ser-Ser-Asn-Asn-Phe-Gly-Ala-Ile-Leu-Ser-Ser-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr；

单字母符号表示为：KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNTY；

现有技术中，GLP-1(1-37)的合成多采用常规依次偶联氨基酸的方式，但该合成方式会使GLP-1(1-37)肽链形成β折叠，导致合成结束时肽链纯度差，产品收率低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种GLP-1(1-37)多肽的合成方法，该合成方法操作简单，合成周期短，成本低，减少了废液的产生，后处理容易，副产物少，产品收率高。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种GLP-1(1-37)多肽的合成方法，具体包括以下步骤：

步骤S1、制备GLP-1(1-37)前体树脂：以载体树脂为起始，将载体树脂加入到固相反应柱中，用DMF洗涤、溶胀，然后将Fmoc-Tyr(tBu)-OH用DMF溶解并与活化剂和缩合剂混合后，加入到上述装有载体树脂的反应柱中，进行缩合反应，使固相的载体树脂和N端Fmoc保护的Fmoc-Tyr(tBu)-OH偶联得到Fmoc-Tyr(tBu)-载体树脂；

步骤S2、根据GLP-1(1-37)多肽的氨基酸序列，按照从C端到N端的偶联顺序，采用固相合成法依次将具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸与Fmoc-Tyr(tBu)-载体树脂进行偶联，得到Fmoc-GLP-1(1-37)-载体树脂；

步骤S3、将Fmoc-GLP-1(1-37)-载体树脂脱除Fmoc保护后，使用混合液和三氟乙酸切割裂解Fmoc-GLP-1(1-37)-载体树脂，得到GLP-1(1-37)粗品肽；

步骤S4、将GLP-1(1-37)粗品肽纯化、转盐、冻干后，得到GLP-1(1-37)多肽成品。

进一步地，载体树脂为酰胺树脂(Rink-Resin)，取代度为0.37mmol/g。

进一步地，Fmoc为9-芴甲氧羰基，Fmoc与氨基相连或与羧基所连的碳原子上的氮原子相连。