[发明专利]一种GLP-1(1-37)多肽的合成方法

权利要求书

1.一种GLP-1(1-37)多肽的合成方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤S1、将载体树脂加入到固相反应柱中洗涤、溶胀，然后将Fmoc-Tyr(tBu)-OH用DMF溶解并与活化剂和缩合剂混合后，加入到固相反应柱中，进行缩合反应，使载体树脂和Fmoc-Tyr(tBu)-OH偶联得到Fmoc-Tyr(tBu)-载体树脂；

步骤S2、按照从C端到N端的偶联顺序，采用固相合成法将氨基酸与Fmoc-Tyr(tBu)-载体树脂进行偶联，得到Fmoc-GLP-1(1-37)-载体树脂；

步骤S3、将Fmoc-GLP-1(1-37)-载体树脂脱除Fmoc保护后，使用混合液和三氟乙酸切割裂解Fmoc-GLP-1(1-37)-载体树脂，得到GLP-1(1-37)粗品肽；

步骤S4、将GLP-1(1-37)粗品肽纯化、转盐、冻干后，得到GLP-1(1-37)多肽。

2.根据权利要求1所述的一种GLP-1(1-37)多肽的合成方法，其特征在于：所述载体树脂为酰胺树脂，取代度为0.37mmol/g。

3.根据权利要求1所述的一种GLP-1(1-37)多肽的合成方法，其特征在于：Fmoc为9-芴甲氧羰基，Fmoc与氨基相连或与羧基所连的碳原子上的氮原子相连。

4.根据权利要求1所述的一种GLP-1(1-37)多肽的合成方法，其特征在于，所述固相合成法包括以下步骤：

步骤A1：使用DBLK脱除Fmoc-Tyr(tBu)-载体树脂的Fmoc保护基，得到NH-Tyr(tBu)-载体树脂，所述DBLK为哌啶和DMF按照体积比为1:3混合组成；

步骤A2：在添加活化剂和缩合剂系统的条件下，NH-Tyr(tBu)-载体树脂和Fmoc保护且侧链保护的苏氨酸偶联，得到Fmoc-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-载体树脂；

步骤A3：根据GLP-1(1-37)多肽的氨基酸序列，重复步骤A1和步骤A2。

5.根据权利要求4所述的一种GLP-1(1-37)多肽的合成方法，其特征在于：活化剂为DIC，缩合剂为HOBt，缩合反应时间为2h。

6.根据权利要求4所述的一种GLP-1(1-37)多肽的合成方法，其特征在于：氨基酸Ser-Ser采用伪二肽Fmoc-Ser(tBu)-Ser(Psi(Me,Me)pro)-OH。

7.根据权利要求6所述的一种GLP-1(1-37)多肽的合成方法，其特征在于：所述C端到N端的偶联顺序为Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-Ser(Psi(Me,Me)pro)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-I le-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-Ser(Psi(Me,Me)pro)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH。

8.根据权利要求1所述的一种GLP-1(1-37)多肽的合成方法，其特征在于，纯化的条件为：以反相十八烷基硅烷为固定相，柱温为35℃，流动相A为体积分数为0.1％的醋酸/水溶液，流动相B为乙腈，流动相A和流动相B按照体积比70:30等梯度洗脱，流速为70-80mL/min，检测波长为214nm。