[发明专利]鸭坦布苏病毒感染性cDNA的制备方法、重组病毒rDTMUV-QY21的制备方法在审
| 申请号： | 202111517150.6 | 申请日： | 2021-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN114196683A | 公开（公告）日： | 2022-03-18 |
| 发明（设计）人： | 陈瑞爱;王婷;黄梅;向程威;杨洁;杨泽坤 | 申请（专利权）人： | 岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心;华农（肇庆）生物产业技术研究院有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/40 | 分类号： | C12N15/40;C12N15/85;C12N7/01;C12R1/93 |
| 代理公司： | 广州市科丰知识产权代理事务所(普通合伙) 44467 | 代理人： | 罗啸秋 |
| 地址： | 526238 广东省肇庆市高*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鸭坦布苏 病毒 感染性 cdna 制备 方法 重组 rdtmuv qy21 | ||
1.一种鸭坦布苏病毒感染性cDNA的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：构建亚基因组质粒，所述亚基因组质粒为质粒pF1、pF2、pF3、pF4，质粒pF1、pF2、pF3、pF4分别含目标片段F1、F2、F3、F4；
步骤2：获取目标片段：从质粒pF1、pF2、pF3、pF4上获取用于连接全长的目标片段f1、f2、f3、f4；
步骤3：体外连接目标片段f1、f2、f3、f4，获得鸭坦布苏病毒感染性全长cDNA；
目标片段F1/f1的序列在序列表SEQ ID NO：1中位置为1-3490；
目标片段F2/f2的序列在序列表SEQ ID NO：1中位置为3471-6599；
目标片段F3/f3的序列在序列表SEQ ID NO：1中位置为6580-10599；
目标片段F4的序列在序列表SEQ ID NO：1中位置为8162-10990；
目标片段f4的序列在序列表SEQ ID NO：1中位置为10580-10990。
2.根据权利要求1所述的鸭坦布苏病毒感染性全长cDNA的制备方法，其特征在于，所述步骤1具体为：
步骤11：利用引物Vector-F、Vector-R以pBR322-Base为模板，通过PCR扩增pBR322载体，然后经胶回收备用，得到的pBR322-Base-T7pro；
步骤12：分别用带同源臂的引物、以DTMUV-QY21全基因组为模板通过RT-PCR技术扩增带同源臂的cDNA片段，得到目标片段F1、F2、F3、F4；
步骤13：将目标片段F1、F2、F3、F4分别和pBR322-Base-T7pro进行同源重组，得到质粒pF1、pF2、pF3、pF4；
步骤12中，扩增目标片段F1所用引物为F1-F、F1-R；
扩增目标片段F2所用引物为F2-F、F2-R；
扩增目标片段F3所用引物为F3-F、F3-R；
扩增目标片段F4所用引物为F4-F、F4-R；
Vector-F、Vector-R、F2-F、F2-R、F3-F、F3-R、F4-F、F4-R的序列如序列表SEQ ID NO：2～SEQ ID NO：9所示；
鸭坦布苏病毒的全长序列如序列表SEQ ID NO：1所示。
3.一种鸭坦布苏重组病毒rDTMUV-QY21的制备方法，其特征在于，采用如权利要求1或2所述的鸭坦布苏病毒感染性cDNA进行体外转录，获得鸭坦布苏重组病毒rDTMUV-QY21。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心;华农（肇庆）生物产业技术研究院有限公司，未经岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心;华农（肇庆）生物产业技术研究院有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202111517150.6/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
