[发明专利]一种用于黑色茶花杂种鉴定的SSR标记引物及应用

说明书

一种用于黑色茶花杂种鉴定的SSR标记引物，所述引物为引物编号：SSR31，上游引物：5′‑CAAGGCAGAGTAGGCTGAGG‑3′，下游引物：5′‑AAAAGGGAAGGGGAAAGTCA‑3′，重复单元：(AGC)7，片段大小：212～273；引物编号：SSR48，上游引物：5′‑GTTGGAGGTTTTTCAGCCAC‑3′，下游引物：5′‑ATTGAAAGTCGCTGCTTCGT‑3′，重复单元：(CCG)7，片段大小：249～300；引物编号：SSR250，上游引物：5′‑ACCTCCAGCTTCCATCAGAA‑3′，下游引物：5′‑ATCTTGACGGGCGTAACATC‑3′，重复单元：(CCG)5，片段大小：261～315。本发明SSR标记重复性好、特异性强；利用SSR分子标记技术对黑色茶花杂种进行了有效鉴定，明确了黑色茶花杂种与亲本遗传变异的关系，实现对黑色茶花杂种后代进行快速鉴定和早期选择。

技术领域

本发明属于茶花杂种鉴定技术领域，具体涉及一种用于茶花杂种鉴定的SSR标记引物及应用。

背景技术

茶花（Camellia）是我国十大名花，也是世界名贵花卉之一。尽管目前国际茶花协会登陆的品种有20000多个，但市场上常见的茶花品种花色主要为红色、粉色及白色，少量品种为黄色，而具有极高观赏价值及开发利用前景的黑色茶花品种仅10余个，且大多为国外选育。黑色茶花品种花瓣呈现黑红色，鲜艳活泼，有蜡质感，满足人们对特异新奇花卉品种的追求；同时黑色茶花花青苷含量丰富，而花青素具有抗氧化衰老的作用，因此，黑色茶花具有良好的商品市场优势及开发利用前景。SSR技术广泛用于分子遗传标记种质资源鉴定等方面，目前SSR分子标记技术用于黑色茶花杂种鉴定还未见报道。

发明内容

本发明目的在于提供一种用于黑色茶花杂种鉴定的SSR标记引物，该引物重复性好、特异性强。

本发明目的按如下技术方案实现：

一种用于黑色茶花杂种鉴定的SSR标记引物，所述引物为（如SEQ ID NO.1～6所示）：

引物编号：SSR31，上游引物：5′- CAAGGCAGAGTAGGCTGAGG -3′，下游引物：5′-AAAAGGGAAGGGGAAAGTCA -3′，重复单元：(AGC)7，片段大小：212～273；

引物编号：SSR48，上游引物：5′- GTTGGAGGTTTTTCAGCCAC -3′，下游引物：5′-ATTGAAAGTCGCTGCTTCGT -3′，重复单元：(CCG)7，片段大小：249～300；

引物编号：SSR250，上游引物：5′- ACCTCCAGCTTCCATCAGAA -3′，下游引物：5′-ATCTTGACGGGCGTAACATC -3′，重复单元：(CCG)5，片段大小：261～315；

鉴定黑色茶花杂种的方法，具体步骤如下：

步骤1，DNA提取： 将黑色茶花杂种及其亲本叶片加液氮研磨后提取DNA，分光光度计检测DNA浓度和纯度，0.8%琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量；

步骤2，SSR扩增：利用本发明SSR引物，以黑色茶花杂种及其杂交亲本DNA为模板进行SSR扩增；

步骤3，对扩增产物采用Qsep100全自动核酸蛋白分析系统进行电泳分离检测和片段大小测定。步骤4，对电泳结果分析：对SSR检测结果进行峰图分析及等位基因的读取和分析，根据峰值图，检测到黑色茶花杂种具有母本及父本扩增谱带，尤其具有父本特异扩增谱带，据此判断其为真杂种。

具体地，步骤1中提取DNA是按北京艾德莱生物科技有限公司CTAB植物基因组DNA快速提取试剂盒的提取方法提取；采用分光光度计（美国Thermo 公司）检测DNA浓度和纯度。