[发明专利]一种用于黑色茶花杂种鉴定的SSR标记引物及应用

权利要求书

1.SSR标记引物在鉴定黑色茶花杂种中的应用，所述引物为：

引物编号：SSR31，上游引物：5′- CAAGGCAGAGTAGGCTGAGG -3′，下游引物：5′-AAAAGGGAAGGGGAAAGTCA -3′，重复单元：(AGC)7，片段大小：212～273；

引物编号：SSR48，上游引物：5′- GTTGGAGGTTTTTCAGCCAC -3′，下游引物：5′-ATTGAAAGTCGCTGCTTCGT -3′，重复单元：(CCG)7，片段大小：249～300；或

引物编号：SSR250，上游引物：5′- ACCTCCAGCTTCCATCAGAA -3′，下游引物：5′-ATCTTGACGGGCGTAACATC -3′，重复单元：(CCG)5，片段大小：261～315。

2.采用权利要求1所述的引物鉴定黑色茶花杂种的方法，其特征在于，具体步骤如下：

步骤1，DNA提取： 将黑色茶花杂种及其亲本叶片加液氮研磨后提取DNA，分光光度计检测DNA浓度和纯度，0.8%琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量；

步骤2，SSR扩增：利用所述的引物，以黑色茶花杂种及其杂交亲本DNA为模板进行SSR扩增；

步骤3，对扩增产物采用Qsep100全自动核酸蛋白分析系统进行电泳分离检测和片段大小测定；

步骤4，对电泳结果分析：对SSR检测结果进行峰图分析及等位基因的读取和分析，根据峰值图，检测到黑色茶花杂种具有母本及父本扩增谱带，据此判断其为真杂种。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤1中提取DNA是按北京艾德莱生物科技有限公司CTAB植物基因组DNA快速提取试剂盒的提取方法提取。

4.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于：步骤2中SSR扩增反应在Veriti 96-WellThermal Cycler上进行，步骤2中25 μL反应体系：含100 ng的模板DNA 1.5 μL，2×TSINGKEMaster Mix 12.5 μL，10 mmol•L-1引物2 μL，超纯水9 μ；PCR扩增程序：94 ℃预变性5min；94 ℃变性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35个循环；72 ℃延伸9 min。