[发明专利]一种小米蛋白和小米蛋白水解物的制备方法及小米蛋白水解物的应用

说明书

本发明公开了一种小米蛋白的制备方法，还公开了使用这种小米蛋白通过水解制备小米蛋白水解物的方法，及小米蛋白水解物用于制备治疗或改善结肠炎症的药物。本发明的有益效果是：小米为药食同源谷物食品，提取的小米蛋白水解物用于制备治疗或改善结肠炎症和肠屏障功能受损的药物，可有效抑制肠道促炎细胞因子表达，增强肠上皮细胞屏障功能，效果显著，且没有毒性，长期服用没有副作用。

技术领域

本发明属于植物提取物用于制备药物技术领域，尤其是一种小米蛋白水解物的制备方法及其用于制备治疗或改善结肠炎症的药物。

背景技术

炎症性肠病(IBD)是一种以腹泻、腹痛和便血为特征的慢性胃肠道疾病，严重影响患者的生活质量。IBD包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)两个亚型。流行病学研究表明，随着患病率逐年增加，IBD已成为西方世界乃至亚洲、非洲和南美洲的主要胃肠道疾病之一。迄今为止，虽然尚未完全了解IBD发病的确切机制，但异常免疫反应和肠道屏障功能的破坏被认为是IBD的主要原因。肠道屏障功能由紧密连接蛋白维持。在IBD中观察到紧密连接蛋白水平的下调，这导致肠道通透性增加。此外，效应T淋巴细胞分化增加和炎症小体异常激活与IBD的发病机制有关。过去几十年IBD的治疗方法主要包括非靶向治疗(如氨基水杨酸盐、糖皮质激素和免疫调节剂)和靶向生物治疗(如抗TNF抗体、抗IL-23抗体和JAK抑制剂)。然而，这些药物在临床环境中的副作用和高昂的价格方面仍然存在局限性。通过饮食干预策略来预防和治疗IBD具有重要意义。

小米，禾本科植物，它耐干旱耐盐碱，生命力顽强，主要分布于干旱地区和半干旱地区，是中国的传统农作物之一。研究表明，摄入富含粟的饮食可以预防结肠炎和结直肠癌的进展。然而其功能性成分仍有待探索。蛋白质是小米的主要成分，占总重量的11％-18％。据报道，小米蛋白的蛋白酶水解物具有抗高血压和抗糖尿病活性。小米蛋白的生物活性肽已被证实证明具有抗氧化和抗真菌活性，并且可以在体外抑制RAW264.7细胞中促炎细胞因子的分泌。然而，小米蛋白水解物的摄入是否可以预防和治疗IBD的进展仍然未知。之前有研究表明常食用小米等谷物粥对肠炎有辅助疗效，并没有对其作为药物方面的应用进行研究。

发明内容

为了研究小米蛋白水解物在制备治疗或改善结肠炎症的药物方面的应用，本发明提供了一种小米蛋白制备方法，包括如下步骤：

首先对小米进行研磨和脱脂处理

(1)使用超微粉碎机研磨小米，将所得小米粉过60目筛，称取100g小米粉与正己烷按料液比1:8-1:12(w/v)混合，超声萃取20min-2h，500-8000g离心，弃上清，并对剩下的残渣重复上述操作一次，将收集的残渣放置于通风橱中自然风干，得到脱脂小米粉；

(2)称取(1)所述方法得到的脱脂小米粉与超纯水按料液比1:4-1:8(w/v)混合并充分搅拌，用1mol/LNaOH调至pH＝7.0，加入30U/g的α-淀粉酶，50°C水浴酶解0.5-4h，期间持续搅拌使体系均匀，反应结束后沸水浴20min灭酶，自然冷却至室温，500-8000g离心去除上清，用纯净水冲洗并重复离心2-4次，将收集的固体沉淀冷冻干燥，得到的提取物A；

如果将得到的脱脂小米粉A与80％丙酮水溶液按照按照1:20-1:30(w/v)混合，超声10min，5000g离心5min，重复提取2次；离心后上清液45℃旋蒸浓缩，冷冻干燥后得到提取物B；

如果离心后获取沉淀，按1:8-12(w/v)的比例加入4M NaOH，水解1h，用浓盐酸调节至pH＝2，按照1:8-12(w/v)的比例加入乙酸乙酯，超声5min，重复3次，收集上清，旋转蒸发后冷冻干燥，得到提取物C；提取物B和提取物C的多酚含量分别为79.4％和86.3％。

小米蛋白水解物的制备包括如下步骤：

(1)称取先前制备的提取物A与超纯水按料液比1:50(w/v)混合，用1mol/L HCL调至pH＝2.0；