[发明专利]一种同时制备ERN-T和ILV-T的方法

权利要求书

1.一种同时制备内质网来源的纳米TRAIL（ERN-T）和表达TRAIL的多囊泡体腔内囊泡（ILV-T）的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1. 用表达人源TRAIL蛋白的病毒转染传代至第2～4代的细胞，得到表达人源TRAIL蛋白的细胞，破碎得到细胞匀浆液；

S2. 将步骤S1所得细胞匀浆液在11000～13000g、3～5℃下离心8～12min后，分离上清液，再通过蔗糖密度梯度离心至分层，自上往下第二层即为ERN-T，第三层即为ILV-T；

其中，所述细胞为脐带间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、牙髓间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、羊水间充质干细胞、羊膜间充质干细胞、心肌细胞、肿瘤相关成纤维细胞中的一种或几种；

步骤S2所述蔗糖密度梯度离心为：将所述上清液加入到蔗糖密度梯度的液柱上层，在105000～115000g、3～5℃下离心14～18h；所述液柱中蔗糖溶液自下而上分别为2.4～2.6M蔗糖溶液A、1.8～2.2M蔗糖溶液B、0.3～0.35M蔗糖溶液C；所述上清液、蔗糖溶液A、蔗糖溶液B、蔗糖溶液C的体积比为1：0.3～0.35：0.61～0.67：1.5～1.7。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤S1所述病毒包括慢病毒、逆转录病毒、腺病毒中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤S1所述病毒用于细胞转染的MOI为3～300。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤S1所述转染的方法为：

S1-1. 将第2～4代的细胞在DMEM完全培养基中培养11～13h后，去除所述DMEM完全培养基；

S1-2. 向步骤S1-1得到的产物中加入含表达人源TRAIL蛋白的病毒和聚凝胺的DMEM/F-12培养基，孵育6～24h后，去除所述DMEM/F-12培养基；

S1-3. 向步骤S1-2得到的产物中加入含胎牛血清的DMEM/F12培养基，培养2～3天后，进行传代培养，第3～4代即为所述表达人源TRAIL蛋白的细胞。

5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，步骤S1-2所述聚凝胺在所述DMEM/F-12培养基中的浓度为6～10μg/mL。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤S1所述破碎为在19～21kHz下超声破碎1～3min。