[发明专利]利用重组毕氏酵母表达诱抗蛋白的方法在审
| 申请号： | 202111500522.4 | 申请日： | 2021-12-09 |
| 公开（公告）号： | CN114181289A | 公开（公告）日： | 2022-03-15 |
| 发明（设计）人： | 于静;迟玉成;许曼琳;张霞;郭志青;李莹;宋新颖;何康 | 申请（专利权）人： | 山东省花生研究所 |
| 主分类号： | C07K14/37 | 分类号： | C07K14/37;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84 |
| 代理公司： | 青岛中天汇智知识产权代理有限公司 37241 | 代理人： | 韩丽萍 |
| 地址： | 266000 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 重组 酵母 表达 蛋白 方法 | ||
1.一种利用重组毕氏酵母表达诱抗蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将毕氏酵母工程细胞株GS115/pPIC9k-Elicitin在YPDA的平板上划线进行纯培养；
(2)挑取单菌落接种于BMGY或BMMY培养基中，所述BMGY或BMMY培养基的pH为5-8，于28-30℃振荡培养至对数生长期OD600＝2-6；
(3)室温下，离心，收集酵母细胞，弃上清；
(4)将酵母细胞重悬于BMGY或BMMY培养基中，至OD600为1.0-2.0，于28-30℃继续培养并加入100％的甲醇至甲醇终浓度为0.25％-1.5％；
(5)每隔一段时间补加100％的甲醇至终浓度为0.25％-1.5％以维持诱导，诱导表达2d-5d，将发酵液室温下离心，在上清液中加入硫酸铵至饱和度80％，沉淀蛋白，离心，沉淀用PBS溶液回溶，用PBS溶液透析除盐后即可得大量的粗蛋白液。
2.根据权利要求1所述的利用重组毕氏酵母表达诱抗蛋白的方法，其特征在于，所述步骤(4)甲醇终浓度为0.5％-1.25％。
3.根据权利要求2所述的利用重组毕氏酵母表达诱抗蛋白的方法，其特征在于，所述步骤(4)甲醇终浓度为1.0％。
4.根据权利要求1所述的利用重组毕氏酵母表达诱抗蛋白的方法，其特征在于，所述BMGY或BMMY培养基的pH为5.5-7.0。
5.根据权利要求4所述的利用重组毕氏酵母表达诱抗蛋白的方法，其特征在于，所述BMGY或BMMY培养基的pH为6.0。
6.根据权利要求1～5任一项所述的利用重组毕氏酵母表达诱抗蛋白的方法，其特征在于，所述步骤(5)诱导表达4d。
7.根据权利要求1所述的利用重组毕氏酵母表达诱抗蛋白的方法，其特征在于，所述步骤(2)振荡培养的条件为30℃，200rpm，16h-18h。
8.根据权利要求1所述的利用重组毕氏酵母表达诱抗蛋白的方法，其特征在于，所述步骤(3)室温下，4000rpm离心5min。
9.根据权利要求1所述的利用重组毕氏酵母表达诱抗蛋白的方法，其特征在于，所述步骤(4)诱导培育的温度为30℃。
10.根据权利要求1所述的利用重组毕氏酵母表达诱抗蛋白的方法，其特征在于，所述步骤(5)每隔24h补加100％的甲醇。
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