[发明专利]一种通过基因编辑技术创制西瓜全缘叶种质的方法在审
| 申请号： | 202111500146.9 | 申请日： | 2021-12-09 |
| 公开（公告）号： | CN114395581A | 公开（公告）日： | 2022-04-26 |
| 发明（设计）人： | 魏春华;张显;闫星;岳贞;张勇;马建祥;李好;杨建强 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84;A01H5/12;A01H6/34;A01H1/02 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 崔自京 |
| 地址： | 712100 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 通过 基因 编辑 技术 创制 西瓜 全缘叶 种质 方法 | ||
1.一种通过基因编辑技术创制西瓜全缘叶种质的方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)根据Cla97C04G076510的CDS序列设计基因编辑的靶位点，包含两个靶点Target1和Target2；
Target1序列：5’-GTGGAAGGTGAACAAAGTA-3’；SEQ ID NO.2；
Target2序列：5’-GCTAAGAGAACAAGCAACG-3’；SEQ ID NO.3；
(2)构建CRISPR/Cas9编辑载体
①以中间载体pCBC-DT1T2为模板，利用引物Target1F/Target2R进行PCR扩增，回收目的片段；
②利用限制性内切酶BsaI-HF对CRISPR/Cas9载体pBSE402进行酶切，回收酶切后的载体pBSE402；
③将步骤①回收的目的片段与步骤②酶切后的载体pBSE402进行同源重组连接，获得连接产物；
④将连接产物转化大肠杆菌感受态DH5α，经测序正确，抽提重组质粒，转化至农杆菌感受态细胞EHA105；
(3)西瓜遗传转化
经验证正确后，用于西瓜遗传转化，获得基因编辑植株Cla97C04G076510-CR。
2.根据权利要求1所述的一种通过基因编辑技术创制西瓜全缘叶种质的方法，其特征在于，步骤(2)①所述引物Target1F/Target2R序列如下：
Target1F：5’-TTCTAGCTCTAAAACTACTTTGTTCACCTTCCACCAATCTCTTAGTCGACTCTAC-3’；SEQ ID NO.4；
Target2R：5’-TCGAAGTAGTGATTGGCTAAGAGAACAAGCAACGGTTTTAGAGCTAGAAATAGC-3’；SEQID NO.5。
3.根据权利要求1所述的一种通过基因编辑技术创制西瓜全缘叶种质的方法，其特征在于，创制的西瓜全缘叶种质在杂交种生产或群体改良中的应用。
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