[发明专利]一种高效生产甘油的基因工程菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种高效生产甘油的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌同时强化表达优化密码子后的3-磷酸甘油脱氢酶和3-磷酸甘油酶，其特征在于，所述3-磷酸甘油脱氢酶为来自酿酒酵母的3-磷酸甘油脱氢酶，其编码基因为gpd1o，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述3-磷酸甘油酶为来自酿酒酵母的3-磷酸甘油酶，其编码基因为gpp2o，核苷酸序列如SEQID NO.4所示；

所述宿主菌株为E.coliBL21(de3)、E.coliBL21(star)或E.coliRosetta；所述基因工程菌构建所用的表达载体中3-磷酸甘油脱氢酶基因位于3-磷酸甘油酶的上游；

所述基因工程菌为重组的E.coliBL21(de3)时，还在基因工程菌中插入分子伴侣1和分子伴侣2；所述分子伴侣1来自大肠杆菌，其编码基因为grol，核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述分子伴侣2来自大肠杆菌，其编码基因为gros，核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述基因工程菌构建所用的表达载体中分子伴侣1位于3-磷酸甘油脱氢酶下游，3-磷酸甘油酶的上游；分子伴侣2位于3-磷酸甘油酶的下游。

2.权利要求1所述的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将酿酒酵母的3-磷酸甘油脱氢酶基因gpd1o插入载体质粒pRSFduet中，构建表达载体pRSFduet-gpd1o；

（2）将酿酒酵母的3-磷酸甘油酶基因gpp2o插入载体质粒pRSFduet-gpd1o中，构建表达载体pRSFduet-gpd1o-gpp2o；

（3）将大肠杆菌的分子伴侣1基因grol插入载体质粒pRSFduet-gpd1o-gpp2o中，构建表达载体pRSFduet-gpd1o-gpp2o-grol；

（4）将大肠杆菌的分子伴侣2基因gros插入载体质粒pRSFduet-gpd1o-gpp2o-grol中，构建表达载体pRSFduet-gpd1o-gpp2o-grol-gros；

（5）将表达载体pRSFduet-gpd1o-gpp2o分别转化进大肠杆菌E.coli BL21(star)和E.coli Rosetta中，将表达载体pRSFduet-gpd1o-gpp2o-grol-gros转化进大肠杆菌E.coliBL21(de3)中，挑选阳性重组子，得基因工程菌E.coliBL21 (de3)/pRSFduet-gpd1o-gpp2o-grol-gros、E.coliBL21(star)/pRSFduet-gpd1o-gpp2o和E.coliRosetta/pRSFduet-gpd1o-gpp2o。