[发明专利]连花清瘟胶囊中有效成分的含量测定方法

说明书

本发明公开了连花清瘟胶囊中有效成分的含量测定方法，该方法采用超高效液相色谱仪，应用一测多评法，以绿原酸为内标物质，测定连花清瘟胶囊中七种有效成分新绿原酸、隐绿原酸、异连翘酯苷A、槲皮苷、4,5‑二‑O‑咖啡酰奎宁酸、甘草酸、绿原酸的含量，为连花清瘟胶囊的质量控制提供了更为可靠、简便、经济的方法依据。

技术领域

本发明属于药品检验技术领域，具体涉及中成药连花清瘟胶囊的含量测定方法。

背景技术

连花清瘟收载于2020年版《中华人民共和国药典》（简称《中国药典》）一部，处方中有连翘、 金银花、炙麻黄、 炒苦杏仁、石膏、 板蓝根、绵马贯众、 鱼腥草、广藿香、 大黄、红景天、薄荷脑、甘草共计十三味中药，具有清热解毒，宣肺泄热之功效，临床上用于治疗流行性感冒属热毒袭肺证。2020年版《中国药典》仅以连翘苷的含量作为连花清瘟的质量控制指标，难以全面准确的评价其内在质量。

一测多评法(quantitative analysis of multi-components by singlemarker,QAMS)于2006年首次提出，并进行了含量测定中的方法学考察。2010年版《中国药典》首次收录QAMS法，但该法仅限于黄连。

目前，2020年版《中国药典》QAMS法的应用已扩展至饮片、提取物、制剂等。但在连花清瘟中尚未见报道。

中国专利CN107149623A中公开了一种中药组合物的含量测定方法，该方法可同时测定多种有效成分，但该方法测定时需要配制多种有效成分的对照品溶液，对于对照品的需求量极大，其检测成本较高。

发明内容

本发明的目的是提供一种连花清瘟中有效成分的含量测定方法，该方法采用一测多评的形式，以绿原酸为内标物质建立相对校正因子，同时测定绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异连翘酯苷A、槲皮苷、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、甘草酸七种有效成分的含量。本法准确可靠，可用于连花清瘟质量控制。

为了实现本发明的目的，发明人提供了以下技术方案。

连花清瘟中有效成分的含量测定方法，使用超高效液相色谱仪进行测定，采用一测多评法，以绿原酸为内标物，建立新绿原酸、隐绿原酸、异连翘酯苷A、槲皮苷、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、甘草酸相对绿原酸的相对校正因子，然后选择绿原酸对照品为标准进行测定，得到连花清瘟胶囊中绿原酸的含量，再根据相对校正因子计算得到新绿原酸、隐绿原酸、异连翘酯苷A、槲皮苷、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、甘草酸的含量。

上述含量测定方法，所述绿原酸对新绿原酸、隐绿原酸、异连翘酯苷A、槲皮苷、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、甘草酸的相对校正因子依次为1.0258-1.0327，1.4620-1.4803，2.6202-2.6388，0.9893-1.0348，1.5265-1.5838，7.5678-7.7449。

上述含量测定方法，所述绿原酸对新绿原酸、隐绿原酸、异连翘酯苷A、槲皮苷、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、甘草酸的相对校正因子依次为1.0301、1.4743、2.6309、1.0184、1.5501、7.6567。

上述含量测定方法，所述相对校正因子的建立包括：

a. 混合对照品的制备：分别精密称取新绿原酸对照品、隐绿原酸对照品、绿原酸对照品、异连翘酯苷A对照品、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸对照品、槲皮苷对照品、甘草酸铵对照品，加甲醇配制成不同质量浓度的系列混合对照品溶液；

b. 色谱条件：采用ACQUITY UPLC® HSS T3色谱柱，以甲醇-乙腈-0.1%磷酸为流动相进行梯度洗脱；

c. 测定：精密吸取混合对照品溶液，注入超高效液相色谱仪，得到混合对照品的含量谱图；