[发明专利]一种与黄瓜成株期耐热相关的SNP标记、引物组、试剂盒及应用

权利要求书

1.一种与黄瓜成株期耐热相关的SNP标记，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述SEQID NO:1的第190位存在T/C多态性。

2.一种用于检测权利要求1所述SNP标记的引物组，正向引物的核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

3.一种用于检测权利要求1所述SNP标记的试剂盒，包括权利要求2所述的引物组和PCR扩增用试剂。

4.权利要求1所述的SNP标记或者权利要求2所述的引物组或者权利要求3所述的试剂盒在耐热黄瓜品种选育中的应用。

5.权利要求1所述的SNP标记或者权利要求2所述的引物组或者权利要求3所述的试剂盒在鉴定或筛选耐热黄瓜中的应用。

6.一种鉴定或筛选耐热黄瓜的方法，包括以下步骤：

1)提取待测黄瓜的基因组DNA；

2)以所述待测黄瓜的基因组DNA为DNA模板，采用权利要求2所述的引物组进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；

3)对所述PCR扩增产物进行测序；或者，对所述PCR扩增产物进行SspI酶切，得到酶切产物，所述酶切产物经凝胶电泳分离后，观察带型；

当对所述PCR扩增产物进行测序时，若所述PCR扩增产物的190位碱基为T，则待测黄瓜为耐热材料，若所述PCR扩增产物的190位碱基为C，则待测黄瓜为不耐热材料；

当对所述PCR扩增产物进行SspI酶切，得到酶切产物，所述酶切产物经凝胶电泳分离后，观察带型时，若SspI酶切的酶切片段的大小为187bp，则待测黄瓜为耐热材料，若SspI酶切的酶切片段的大小为241bp时，则待测黄瓜为不耐热材料。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系以10μl计，包括：7.5ng DNA模板，所述正向引物和所述反向引物各50ng，5μL 2*3G Taq MasterMix forPAGE和余量的双蒸水。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序为：95℃预变性3分钟；95℃变性15秒，55℃退火15秒，72℃延伸30秒，35个循环；72℃保温5分钟。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述SspI酶切的体系以10μl计，包括：PCR扩增产物3μl，内切酶0.2μl，NEBuffer 3.11μl和双蒸水5.8μl；所述SspI酶切的温度为37℃；所述SspI酶切的时间为2h。

10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述凝胶电泳采用质量浓度为6％的非变性聚丙烯酰胺凝胶；所述凝胶电泳的功率为150V恒功率；所述凝胶电泳的时间为70min。