[发明专利]一种浆母细胞与胰岛免疫损伤相关性的评估方法

权利要求书

1.一种浆母细胞与胰岛免疫损伤相关性的评估方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)分离不同阶段1型糖尿病病人或NOD模型动物胰腺淋巴结组织和脾脏中的免疫细胞；优选地，不同阶段的所述NOD模型动物为饲养至4周、8周、12周、16周、20周、24周的NOD模型动物；优选地，所述NOD模型动物为NOD小鼠；

2)免疫细胞分析，分选浆母细胞，构建浆母细胞含量与1型糖尿病病人或NOD模型动物不同阶段的关系，为正相关；

3)将浆母细胞或浆母细胞与T淋巴细胞的组合，进行过继转移，监测发生糖尿病的速度和比例，以及胰岛炎情况；

和/或，将T淋巴细胞、浆母细胞与胰岛共培养，检测胰岛凋亡情况；

4)建立胰岛炎评估标准，并根据胰岛中免疫细胞浸润程度进行胰岛炎评分。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，胰岛炎评分标准：0分，完整胰岛，无免疫细胞浸润；1分，仅在胰岛周围有免疫细胞浸润，或胰岛内免疫细胞浸润面积小于25％；2分，胰岛内免疫细胞浸润面积达25％-50％；3分，胰岛内免疫细胞浸润面积达50％-75％；4分，胰岛内免疫细胞浸润面积超过75％。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中包括分离胰腺淋巴结和脾脏，研磨得细胞悬液，胰腺淋巴结细胞悬液离心后得到胰腺淋巴结免疫细胞；脾脏细胞沉淀中加入红细胞裂解液，裂解后离心得到脾脏免疫细胞。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中包括将步骤1)的免疫细胞转移至流式管，加入流式抗体预混孵育，再加入细胞死活染料孵育，经Stain buffer洗涤重悬后，使用流式细胞仪分选所需的T淋巴细胞和浆母细胞。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中包括将T淋巴细胞与浆母细胞共同转移至NOD/SCID小鼠，监测随机血糖，取得胰腺组织，切片，进行HE染色及免疫组化染色，采集图片。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中T淋巴细胞与浆母细胞的比例为1～10:10～1，优选为20:2～5或2:1。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中检测胰岛凋亡的方法为TUNEL法。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述将T淋巴细胞与浆母细胞共同转移为从眼底静脉丛匀速推注；所述监测随机血糖为通过剪尾法监测NOD/SCID小鼠随机血糖。

9.一种浆母细胞用于制备胰岛免疫损伤剂的用途，所述胰岛免疫损伤剂任选的还可包含T淋巴细胞。

10.如权利要求9所述的浆母细胞用于制备胰岛免疫损伤剂的用途，其特征在于，所述T淋巴细胞与浆母细胞的比例为1～10:10～1，优选为2:1或20:2～5。