[发明专利]一种解淀粉芽孢杆菌菌剂的制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种解淀粉芽孢杆菌菌剂的制备方法及应用，制备方法包括：步骤一：菌种活化，将解淀粉芽孢杆菌菌株Ba168接入LB固体培养基，转接2代；步骤二：种子液制备，将活化后的解淀粉芽孢杆菌菌株Ba168接入到LB液体培养基中，放到恒温摇床上振荡，即得种子液；步骤三：发酵液制备，将种子液与固体发酵培养基以1：10的质量比混合，发酵；步骤四：菌剂制备，将发酵液与硅藻土载体以93.5：6.5的质量比混合后制成母液，烘干后研磨，得到母粉；将母粉与木质素磺酸钠、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、糊精保护剂以82：5：7：2：4的质量比混合后烘干，即得。本发明制备的解淀粉芽孢杆菌菌剂绿色环保无污染，能够有效防治烟草花叶病毒病。

技术领域

本发明涉及农业和生物技术领域，具体涉及一种解淀粉芽孢杆菌菌剂的制备方法及应用。

背景技术

烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus；TMV)是一种RNA病毒，是植物病毒中最具有破坏性的病毒之一，它可侵染36科400多种植物，包括茄科的烟草和番茄、番杏科、豆科、葫芦科、十字花科等。烟草花叶病毒主要在烟草幼苗期和生长前期为害，烟草花叶病毒不仅危害烟株生长而且会降低烟草品质，影响上等烟比例，大幅降低烟草经济效益。烟草花叶病毒通过汁液摩擦传毒，尤其农事操作过程中传播速度非常快，危害很大。该病毒同时也可以在土壤中进行传播，也是烟草连作障碍的主要原因之一。烟草花叶病毒在土壤中可以存活3年，因此化学防治和轮作倒茬都难于防治该种病毒病。

对于烟草花叶病毒的防治，国内外每年都有大量的报道，包括新的天然抗病毒剂的发现，以及大量的新型化学药剂的开发和应用。以天然植物活性物质为有效成分的植物源抗病毒剂具有环境友好、安全、开发成本低等优点，但到目前为止，只有很少一部分物质得到实际应用。而且常用的化学农药防治，不但效果低、毒性大还会造成环境污染等严重问题，且长期连续高剂量的施用单一的抗病毒化学农药，容易造成大量农药的残留、环境再污染以及病毒的耐药性提高等问题。烟草花叶病毒以预防为主，一旦田间管理不当，就容易大面积发病，因此寻找一种经济、有效的防治烟草花叶病毒的生物菌剂成为保障烟草安全绿色生产的迫切任务。

植物根际促生菌(PGPR)，是植物根际中能够促进植物生长、防治病害、增加作物产量的多种有益微生物，是植物病毒病绿色防控研发热点，特别是芽孢杆菌属具有很好的应用前景。芽孢杆菌首先是通过占位以及竞争占位来排斥病毒的作用，同时通过产生抗菌物质来抑制有害生物，另一方面是直接分泌特异性抗性物质抵抗病原菌。其次芽孢杆菌属可分泌酶类、金属离子载体等促进植物对营养元素的吸收，分泌植物激素促进植物生长，提高植物的免疫力。因此，芽孢杆菌属在植物病毒病绿色防控中有很好的应用前景。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明提供了一种解淀粉芽孢杆菌菌剂的制备方法及应用。

具体的，一方面，本发明提供了一种解淀粉芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

步骤一：菌种活化

将解淀粉芽孢杆菌菌株Ba168接入LB固体培养基，放入31℃恒温箱内培养，连续转接2代，得到活化后的解淀粉芽孢杆菌菌株Ba168；

所述LB固体培养基的配方：10g胰蛋白胨、10gNaCl、5g酵母浸粉、10g蔗糖、18g琼脂和1000mL蒸馏水，控制LB固体培养基的PH值为7.5；

步骤二：种子液制备

在无菌操作台上，用接种环将步骤一中活化后的解淀粉芽孢杆菌菌株Ba168接入到LB液体培养基中，放到恒温摇床上振荡，在温度36℃、转速220r/min条件下振荡18小时，即制得种子液；

LB液体培养基的配方：10g胰蛋白胨、10gNaCl、5g酵母浸粉、10g蔗糖和1000ml蒸馏水；

步骤三：发酵液制备