[发明专利]一种解淀粉芽孢杆菌菌剂的制备方法及应用

权利要求书

1.一种解淀粉芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

步骤一：菌种活化

将解淀粉芽孢杆菌菌株Ba168接入LB固体培养基，放入31℃恒温箱内培养，连续转接2代，得到活化后的解淀粉芽孢杆菌菌株Ba168；

所述LB固体培养基的配方：10g胰蛋白胨、10gNaCl、5g酵母浸粉、10g蔗糖、18g琼脂和1000mL蒸馏水，控制LB固体培养基的PH值为7.5；

步骤二：种子液制备

在无菌操作台上，用接种环将步骤一中活化后的解淀粉芽孢杆菌菌株Ba168接入到LB液体培养基中，放到恒温摇床上振荡，在温度36℃、转速220r/min条件下振荡18小时，即制得种子液；

LB液体培养基的配方：10g胰蛋白胨、10gNaCl、5g酵母浸粉、10g蔗糖和1000ml蒸馏水；

步骤三：发酵液制备

将步骤二中的种子液与固体发酵培养基以1：10的质量比混合，在温度36℃、初始PH值6.0条件下发酵，直至活孢子数达到500亿/克，停止发酵，得到解淀粉芽孢杆菌菌株Ba168发酵液；

所述固体发酵培养基的制备：将150g豆饼粉、350g玉米粉、100g淀粉酶、50gNa₂HPO₄、10gNaCl、75g蔗糖、1gMgSO₄、0.5gMnSO₄混合后灭菌，即得；

步骤四：菌剂制备

将步骤三中的解淀粉芽孢杆菌菌株Ba168发酵液与硅藻土载体以93.5：6.5的质量比混合后制成母液，烘干后研磨，得到母粉；

将母粉与木质素磺酸钠、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、糊精保护剂以82：5：7：2：4的质量比混合后烘干，即得所述解淀粉芽孢杆菌菌剂。

2.根据权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌菌剂为可湿性粉剂。

3.根据权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌Ba168，分类学命名为：解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens；保藏登记编号为CGMCC No.6462，保藏机构为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏时间为2012年08月21日。

4.根据权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌菌株Ba168从烟草根际土壤中分离得到。

5.一种权利要求1-4任一项所述解淀粉芽孢杆菌菌剂的应用，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌菌剂用于防治烟草花叶病毒，用量为1g/m²。

6.根据权利要求5所述解淀粉芽孢杆菌菌剂的应用，其特征在于，将解淀粉芽孢杆菌菌剂用水稀释300倍，制成喷雾，喷洒于烟苗的叶面。

7.根据权利要求6所述解淀粉芽孢杆菌菌剂的应用，其特征在于，烟苗移栽后一个月，对烟苗的叶面进行第一次喷雾，间隔10天，再进行第二次喷雾。

8.根据权利要求5所述解淀粉芽孢杆菌菌剂的应用，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌菌剂对烟草花叶病毒的防治效果达到82.95％。