[发明专利]一种利用纤维素诱导型启动子提高里氏木霉纤维素水解酶活的方法

权利要求书

1.一种利用纤维素诱导型启动子提高里氏木霉纤维素水解酶活的方法，步骤是：

(1)以里氏木霉QEB4基因组为模板，利用引物对Egl2-F/Egl2-R扩增含有纤维素诱导型启动子的核苷酸序列，该启动子命名为Pegl2，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；以里氏木霉QEB4基因组为模板扩增xyr1基因及其终止子区域，利用引物对Hph-UF/Hph-UR、Hph-DF/Hph-DR分别扩增hph基因的上下游同源臂，然后将其上游同源臂、抗性基因ptrA、Pegl2、xyr1基因及其终止子、下游同源臂按顺序进行融合，制得表达盒，该表达盒命名为Pegl2-xyr1过表达盒；其中所述引物的核苷酸序列如下：

Egl2-F：AAACACCTCGCTCCAGTGC；

Egl2-R：TGTCGATGACGGGGAGATAT；

Hph-UF：GCTGTTCTCCAAGGCGTCA；

Hph-UR：AACAAAGATGCAAGAGCGGGGAGCCGAGAGGGTAGTAATG；

Hph-DF：AGAAAGGCATTTAGCAAGAAGG；

Hph-DR：TTCAGGGCGAAGCTGTCC；

(2)将步骤(1)构建的制得Pegl2-xyr1过表达盒转化到里氏木霉QEB4菌株中，得到纤维素水解酶活性提高的里氏木霉工程菌株，该菌株命名为QE2X；

(3)将工程菌株QE2X在设定的发酵培养基中培养，发酵条件为32±2℃、220±20r/min，发酵过程中定时检测纤维素水解酶活性；其中，所述发酵培养基配方是：微晶纤维素25-35g/L，CaCl₂ 1-1.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5-0.8g/L，KH₂PO₄ 3-5g/L，(NH₄)₂SO₄ 2-4g/L，CaCO₃0.5-1.0g/L，玉米浆10-20g/L，FeSO₄·7H₂O 0-0.02g/L，MnSO₄·H₂O 0-0.01g/L，ZnSO₄·7H₂O 0-0.005g/L，CoCl₂·2H₂O 0-0.01g/L，pH 4.0-6.0。

2.根据权利要求1所述利用纤维素诱导型启动子提高里氏木霉纤维素水解酶活的方法，其特征在于：所述工程菌株QE2X的发酵条件为32℃、220r/min，发酵培养基配方是：微晶纤维素30g/L，CaCl₂ 1.2g/L，MgSO₄·7H₂O 0.7g/L，KH₂PO₄ 5g/L，(NH₄)₂SO₄ 3g/L，CaCO₃0.8g/L，玉米浆15g/L，FeSO₄·7H₂O 0.01g/L，MnSO₄·H₂O 0.0032g/L，ZnSO₄·7H₂O0.0014g/L，CoCl₂·2H₂O 0.004g/L，pH 5.0。