[发明专利]一种碳荧光微球侧流层析高灵敏定量检测方法及应用

说明书

本发明公开了一种碳荧光微球侧流层析高灵敏定量检测方法及应用。所述检测方法利用碳荧光微球良好的荧光特性，结合碳荧光微球标记技术和侧流层析技术，在优化实验条件的基础上，构建荧光侧流层析试纸条。试纸条进行检测后，采用碳荧光微球侧流层析检测测试带和质控带荧光信号强度，并以荧光强度得到积分面积的曲线，进而依据碳荧光微球侧流层析仪获取的标准曲线实现分析物的定量检测。本发明的检测方法具有标记稳定性好、非特异性低、灵敏度高、线性范围宽以及定量准确的优势。本发明适用于夹心法和竞争法检测方法，分析物可以是小分子、抗原、抗体、激素、抗生素、细菌或病毒及其他生化标志物，可应用于食品安全、环境监测等诸多相关领域。

技术领域

本发明涉及一种侧流层析检测方法，尤其涉及一种以优选材料为基础，利用碳荧光微球标记配体实现分析物定量检测的方法及相应的碳荧光微球侧流层析试纸条，特别公开了一种基于碳荧光微球的荧光免疫层析技术，可实现多种分析物的半定量与定量检测，属于荧光免疫检测技术领域。

背景技术

侧流层析技术(Lateral flow assay，LFA)于1960年代末首次出现，用于监测血清蛋白。1976年出现了第一个自制的LFA，以检测尿液中的人绒毛膜促性腺激素(hCG)。该测试的原理基于抗体-抗原特异性相互作用。从那时起，它就被广泛用于检测各种分子，例如癌症标志物，微生物，霉菌毒素，重金属和农药等。与常规分析方法相比，侧流层析技术具有低成本，易于操作，使用方便，现场响应，结果可视化等诸多优点。其中，胶体金免疫层析使用最广泛。胶体金因其化学稳定性高、比表面积大、成本低、容易制备等优点成为最常用的标记物，但存在灵敏度偏低、稳定性差的局限。因此，层析技术迫切需要开发新型的标记材料。

荧光因其更灵敏而在传感和成像领域受到广泛关注。一些发光标记材料，例如荧光/磷光微球、量子点微球、上转换发光微球等材料也逐渐被引入层析技术，其灵敏度高于胶体金试纸条。但是，仍然存在一些问题，如制备工艺复杂、成本高、稀土上转换发光材料的量子效率通常较低且需要特定的激光器光源。因此，开发制备简单、成本低、发光强的荧光微球具有重要的现实意义。

碳点(Carbon dots，CDs)又称碳纳米点，是一类尺寸小于10nm的零维荧光准球形纳米粒子。CDs的关键特性包括激发光/pH依赖性、化学稳定性、抗光漂白性和上转换荧光。与半导体量子点相比，CDs的低毒性和高生物相容性使其成为生物成像和化学生物传感中半导体量子点的有力竞争者。基于CDs的荧光分析由于具有灵敏度高、操作简便、成本低等优势，在分析检测领域具有巨大的应用潜力。目前，基于碳点的侧流层析技术已有报道，然而，此类CDs的荧光量子效率偏低，构建二氧化硅包被的微球时会存在自淬灭等问题，靶标检测灵敏度偏低。因而，制备高量子效率的碳荧光微球并应用于侧流层析标记与检测具有重要意义。

发明内容

本发明的主要目的就是提供一种及碳荧光微球侧流层析高灵敏定量检测方法及相应的荧光侧流层析试纸条，以克服现有侧流层析标记材料存在的部分不足。

本发明的另一目的还在于提供一种碳荧光微球在侧流层析检测领域中的应用。

为实现前述发明目的，本发明采用的技术方案包括：

本发明实施例提供了一种非诊断目的的碳荧光微球侧流层析高灵敏定量检测方法，其包括：

1)使结构如式(Ⅰ)所示的化合物与支化聚乙烯亚胺进行水热反应，制得碳荧光微球；

2)在所述碳荧光微球的表面修饰羧基；

3)将待分析物对应的抗体或适配体连接到步骤2)所获碳荧光微球表面，得到抗体修饰的碳荧光微球或适配体修饰的碳荧光微球；

4)在层析膜上设有检测线和质控线，其中质控线固定有能与待分析物对应的抗体或适配体特异性结合的生物分子，所述检测线固定有能与待分析物结合或与步骤3)所述抗体或适配体竞争结合分析物的抗原或抗体；