[发明专利]一种蒙自兰快速繁殖方法及培养基

说明书

本发明涉及兰科植物快速繁殖领域，公开了一种蒙自兰快速繁殖方法及培养基，包括步骤：S1准备材料，S2无菌播种，S3丛芽增殖，S4生根壮苗，S5移栽。本发明将蒙自兰种子作为外植体，采用不同培养基经过无菌播种、丛芽增殖、壮苗培养和无菌苗移栽的繁殖步骤，可以获得大量幼苗。该种方法具有种子萌发率高、成苗快、种苗品质好、成本低等特点，幼苗移栽成活率高，能为蒙自兰种苗生产提供一条有效途径。

技术领域

本发明涉及兰科植物快速繁殖领域，尤其涉及一种蒙自兰快速繁殖方法及培养基。

背景技术

蒙自兰Mengzia foliosa(KingPantl.)W.C.Huang,Z.J.LiuC.Hu，兰科多年生草本植物，分布于中国云南南部、泰国的山坡林下。(备注：原名华白及，针对华白及所在的兰科龙嘴兰族系统发育的研究结果表明，华白及不属于白及属物种，应该单独成立新属-蒙自兰属。国际植物学期刊Molecular Phylogenetics and Evolution上在线发表该研究成果，华白及更名为蒙自兰)。

蒙自兰(原名华白及)的野生资源稀少，已被列入国家珍稀濒危保护的濒危植物(Endangered,EN)(中国高等植物受威胁物种名录)和《华盛顿公约》(CITES)——附录Ⅱ。其模式标本由英国植物采集家奥古斯汀·亨利于1898年采自云南蒙自，存放于英国伦敦邱园标本馆。发现至今120年左右，鲜有发现野生种群的报道，研究者对它的了解局限于馆藏的3份标本。上海辰山植物园研究人员于2018年5月在其模式产地云南蒙自发现疑似野生种群，移种上海辰山植物园后开花鉴定确认；随后开展了一系列人工栽培和繁殖研究实验。最近有报道远离模式产地的云南省镇康县发现了另一个野外居群，其种群数量不超过300株。

兰科植物种子细小，且胚发育不完全。自然状态下种子萌发率很低，且须借助共生菌提供营养。人工栽培条件下不同兰花种子需要的无菌培养基各异。种苗快繁是实现野生濒危兰科植物资源再生和合理开发利用的有效途径。而传统的繁殖方式为假鳞茎分株繁殖，该方法操作简单，但繁殖系数低，繁殖周期长，难以满足大规模的种苗需求。为加快繁殖速度，缩短繁殖周期，在规模化的育苗中通常采用无菌培养的方式。而蒙自兰由于野外材料资源稀缺，其无菌播种及快速繁殖相关研究空白。假如能够建立一套高效的快速繁殖技术体系，不但可以为该物种的种群回归和恢复等保育生物学研究提供帮助，还能为其开花调控机理研究和缩短育种周期提供理论依据，以及为进一步开发蒙自兰植物资源奠定基础。因此，如何实现蒙自兰快速繁殖，帮助该物种的大规模人工繁育是本领域亟待解决的问题。

发明内容

本发明提供一种蒙自兰快速繁殖方法，包括以下步骤：

S1准备材料：选取健康的蒙自兰植株，于开花时进行人工授粉，将授粉后的形成的蒴果的种子用作播种；

S2无菌播种：将种子接种到萌发培养基上待其萌发，所述萌发培养基包含MS基础培养基、1/2MS基础培养基、1/3MS基础培养基中的一种；

S3丛芽增殖：将萌发后叶片分化的小苗接种到增殖培养基上待其增殖，所述增殖培养基包含1/2MS基础培养基；

S4生根壮苗：将增殖后的小苗接种到壮苗培养基上待其生根壮苗，所述壮苗培养基包含1/2MS基础培养基；

S5移栽：将生根壮苗后的蒙自兰瓶苗转移到温室内，5—7天后将无菌苗从培养瓶中取出、冲洗、种植在介质中，再置于温室内遮阴处，室温不超过28℃，保持湿度60％—70％，待植株稳定生长后进行水肥养护。

在一种可行的方案中，上述步骤S1、S2阶段，所述用于萌发的种子的成熟度为85—115天，其中人工花授粉后105天形成的蒙自兰种子活力较强，同等条件下萌发率最高。