[发明专利]一种桑干细胞的制备方法及应用

权利要求书

1.一种桑干细胞的制备方法，其特征在于，

所述方法包括：利用桑树外植体放入到蔗糖高渗透液中处理，获得桑形成层组织，将所述桑形成层组织种植在固体培养基上，获得桑干细胞团，酶解所述桑干细胞团，分离形成单个桑干细胞，利用液体培养基传代培养、放大培养所述单个桑干细胞，获得桑干细胞培养物；

其中，所述酶解采用纤维素酶和果胶酶。

2.如权利要求1所述的桑干细胞的制备方法，其特征在于，

所述桑树外植体为叶片、芽尖、叶柄和茎段中的一种。

3.如权利要求1所述的桑干细胞的制备方法，其特征在于，

所述桑形成层组织的培养条件为温度26±2℃，光照时间为12h，pH值5.5～6.0，培养10～20d。

4.如权利要求1所述的桑干细胞的制备方法，其特征在于，

所述酶解中，纤维素酶的用量为质量分数为1％～3％，果胶酶的质量分数为0.1～0.5％，酶解的时间为1～3h。

5.如权利要求1所述的桑干细胞的制备方法，其特征在于，

所述固体培养基的组成为：含有10～25g/L蔗糖、7.5g/L琼脂，0.1～0.5mg/L的6-苄氨基嘌呤、0.1～1.0mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸和0.1～1.0mg/L萘乙酸的B5培养基。

6.如权利要求1所述的桑干细胞的制备方法，其特征在于，

所述的液体培养基的组成为：含有0.2～1.5mg/L的6-苄氨基嘌呤、10～30mg/L的蔗糖、0.5～1.5mg/L的甲基茉莉酮酸酯和1.0～2.0mg/L的萘乙酸的B5培养基。

7.如权利要求1所述的桑干细胞的制备方法，其特征在于，

所述桑树外植体处理前，需经紫外灭菌，乙醇溶液漂洗，无菌水洗涤，80～120mg/L的抗坏血酸溶液中浸泡3～10min，再将所述桑树外植体浸入1％苯菌灵、1％的头孢氨苄的混合溶液中灭菌处理5～20min，无菌水洗涤处理。

8.如权利要求1所述的桑干细胞的制备方法，其特征在于，

所述桑树外植体放大培养的条件为：将传代培养的桑干细胞悬液加入到含2.5L液体培养基生物反应器中培养，培养至第7天时，加入的新鲜液体培养基，继续培养后，获得桑干细胞培养物。

9.权利要求1-8任一所述方法制备的桑干细胞在如下任一中的应用，

(A1)制备抗氧化、抗衰老药品；

(A2)制备化妆品；

(A3)制备降血糖的产品。