[发明专利]用于检测伏马毒素的胶体金试纸条、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测伏马毒素的胶体金检测制剂，所述胶体金检测制剂包括胶体金试纸条和酶联反应孔，所述胶体金试纸条包括样品垫、NC膜、吸收垫，所述NC膜上设置有T线和C线；其特征在于：

所述酶联反应孔中冻干保存有伏马毒素单克隆抗体标记的胶体金；所述伏马毒素单克隆抗体标记的胶体金中伏马毒素单克隆抗体的标记量为9～15μg/mL、优选为12μg/mL；

所述T线处包被有伏马毒素完全抗原，用于竞争结合所述伏马毒素单克隆抗体标记的胶体金；所述T线由T线抗原划线液制备而成，所述T线抗原划线液中伏马毒素完全抗原的浓度为1.2～1.8mg/mL；

所述C线处包被有羊抗小鼠抗体，用于捕获未结合的所述伏马毒素单克隆抗体标记的胶体金。

2.根据权利要求1所述的所述胶体金检测制剂，其特征在于，所述伏马毒素单克隆抗体标记的胶体金的制备方法：

S1、制备胶体金溶液；

S2、取OD值为1的胶体金溶液1mL，调整pH至8.5，加入9～15μg、优选为12μg/mL的伏马毒素单克隆抗体，混匀，封闭，离心，加入洗金缓冲液，复溶沉淀，离心，最后加入重悬上样液重悬；得到所述伏马毒素单克隆抗体标记的胶体金。

3.根据权利要求2所述的胶体金检测制剂，其特征在于：所述洗金缓冲液中含有质量百分比浓度为0.2～1％的BSA、质量百分比浓度为1～10％的蔗糖、质量百分比浓度为0.5～2％的吐温-20、10mM的Tris缓冲液；pH为9.0；

所述重悬上样液中含有质量百分比浓度为1～3％的BSA、质量百分比浓度为1～3％的蔗糖、质量百分比浓度为5～10％的果糖、质量百分比浓度为1～3％的PEG6000、质量百分比浓度为0.5～2％的Brij35、0.1M的PB溶液，pH为6.5。

4.根据权利要求2所述的胶体金检测制剂，其特征在于：在S1中，所述胶体金采用氯金酸：柠檬酸钠的质量比1：1.5～1.8制备得到；

优选的，所述胶体金采用氯金酸：柠檬酸钠的质量比1：1.7制备得到。

5.根据权利要求1所述的所述胶体金检测制剂，其特征在于，

所述T线抗原划线液为含有体积比为5～20％甲醇的、浓度为50～100mM的PB缓冲液；

优选的，所述T线抗原划线液为含有体积比为10％甲醇的浓度为100mM的PB缓冲液；

更优选的，所述T线抗原划线液的pH值为6.5。

6.根据权利要求1所述的所述胶体金检测制剂，其特征在于，

所述C线抗体划线液中含有0.1～0.3mg/mL的羊抗小鼠抗体，优选为0.3mg/mL；

更优选的，C线抗体划线液为含有0.1～0.3mg/mL羊抗小鼠抗体、质量百分比浓度为2.5％的蔗糖、50mM的PB溶液。

7.根据权利要求1所述的所述胶体金检测制剂，其特征在于，所述伏马毒素完全抗原采用伏马毒素半抗原采用EDC法与BSA偶联得到。

8.一种用于检测伏马毒素的试剂盒，所述试剂盒中含有如权利要求1～7任一项所述的胶体金检测制剂，其特征在于，所述试剂盒中还含有样本处理液、伏马毒素标准品和样品稀释液；

所述样本处理液为体积百分比浓度为80％甲醇水溶液；

所述样品稀释液为含有质量百分比浓度为0.5％的吐温-20的10mM的Tris溶液，pH为6.5。

9.一种伏马毒素的检测方法，其特征在于，采用权利要求8所述的试剂盒进行检测，至少包括以下步骤：

S1、对待测样本加入所述样本处理液，得混合物；

S2、将所述混合物离心，取上清用所述样品稀释液稀释，得到待测液；

S3、在酶联反应孔加入200μL待测液，35～38℃条件下孵育5～8min，将孵育得到的液体滴加于所述胶体金试纸条的样品垫上，或将所述胶体金试纸条插入所述酶联反应孔中，通过手持式读卡器测定显色值。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，

所述待测样本选自食用油或粮食作物制备的粉状物。