[发明专利]用于靶多核苷酸测序的衔接子、构建体、方法和应用

权利要求书

1.一种用于表征靶多核苷酸的衔接子，所述衔接子包含用于装载多核苷酸结合蛋白的第一区段和用于连接靶多核苷酸的第二区段，所述第一区段和所述第二区段之间设反向核酸双链区段，所述反向核酸双链区段与所述多核苷酸结合蛋白接触之后能够停滞所述多核苷酸结合蛋白。

2.根据权利要求1所述的衔接子，其中所述第一区段上用于装载多核苷酸结合蛋白的多核苷酸结合蛋白结合位点与所述反向核酸双链区段连接。

3.根据权利要求1或2所述的衔接子，其中所述反向核酸双链区段包括由反向碱基基团形成的一个或多个相同或不同的互补碱基对。

4.根据权利要求3所述的衔接子，其中所述反向核酸双链区段含有1至10个反向碱基对，或1至5个反向碱基对。

5.根据权利要求4所述的衔接子，其中所述反向碱基基团选自反向胸苷（反向dTs）、反向腺苷（反向dAs）、反向鸟苷（反向dGs）、反向胞苷（反向dCs）、锁核酸 (LNA)或其他形成反向核酸双链的化学基团中的一种或多种。

6.根据权利要求2所述的衔接子，其中所述衔接子还包含与所述反向核酸双链区段在远离所述靶多核苷酸的一侧连接的第三区段，所述第三区段包含用于与系链结合的游离末端，所述系链与跨膜孔或所述跨膜孔所在的膜结合。

7.根据权利要求6所述的衔接子，其中所述反向核酸双链区段的一端的两条链分别与所述第一区段和所述第三区段连接，所述反向核酸双链区段的另一端与所述第二区段的一端连接，所述第二区段的另一端与所述靶多核苷酸连接。

8.根据权利要求7所述的衔接子，其中所述反向核酸双链区段为3’-5’核酸双链区段，并与其两端的核酸序列构成5’-3’-3’-5’-5’-3’方向的衔接子，或所述反向核酸双链区段为5’-3’ 核酸双链区段，并与其两端的核酸序列构成3’-5’-5’-3’-3’-5’方向的衔接子。

9.根据权利要求1或2所述的衔接子，其中所述靶多核苷酸是完全双链多核苷酸、部分双链多核苷酸或单链多核苷酸。

10.一种用于表征靶多核苷酸的构建体，所述构建体包含权利要求1-9中任一项所述的衔接子，和所述靶多核苷酸和/或所述多核苷酸结合蛋白，

其中，所述衔接子的所述第二区段与所述靶多核苷酸的任一端或两端或其附近连接；

所述多核苷酸结合蛋白装载在所述第一区段上。

11.一种控制多核苷酸结合蛋白在靶多核苷酸上装载的方法，所述方法包括：

使多核苷酸结合蛋白装载到具有反向核酸双链区段的衔接子上，其中所述多核苷酸结合蛋白停滞在所述衔接子的反向核酸双链区段处；以及使所述装载有靶多核苷酸结合蛋白的衔接子连接到所述靶多核苷酸；或

提供具有靶多核苷酸的构建体，其中所述靶多核苷酸在其一端或两端或其附近与具有反向核酸双链区段的衔接子连接；以及使所述构建体与所述多核苷酸结合蛋白接触，使得所述多核苷酸结合蛋白停滞在所述衔接子的反向核酸双链区段处。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述衔接子如权利要求1至9中任一项所定义；所述多核苷酸结合蛋白结合到所述衔接子的多核苷酸结合蛋白结合位点；和/或，每个所述反向核酸双链区段可以停滞1个或多个所述多核苷酸结合蛋白。