[发明专利]一种鉴定硝化微生物的方法

权利要求书

1.一种鉴定硝化微生物的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

S1、对土壤进行预培养；

S2、取土壤分别加入¹⁴N-Urea、¹⁴N-(NH₄)₂SO₄、¹⁵N-Urea和¹⁵N-(NH₄)₂SO₄进行同位素微宇宙实验，分别孵育，然后分别提取土壤DNA；

S3、在DNA中加入CsCl溶液和GB溶液,调节折光率，然后进行超高速离心,然后进行分层纯化得到不同密度层级的DNA溶液；

S4、对DNA溶液每个密度层级进行折光率检测并计算浮力密度，经后处理再利用荧光定量PCR确定密度层级的amoA基因丰度；

S5、通过amoA基因丰度和浮力密度判断硝化微生物标记程度。

2.根据权利要求1所述的一种鉴定硝化微生物的方法，其特征在于，步骤S1土壤预培养为在20-30℃下保持55-65％土壤田间最大持水量5-8天。

3.根据权利要求1所述的一种鉴定硝化微生物的方法，其特征在于，步骤S2孵育过程土壤中含有90-110mg/kg的¹⁴N-Urea或¹⁴N-(NH₄)₂SO₄或¹⁵N-Urea或¹⁵N-(NH₄)₂SO₄。

4.根据权利要求1所述的一种鉴定硝化微生物的方法，其特征在于，步骤S3调整折光率为1.4015±0.0002。

5.根据权利要求1所述的一种鉴定硝化微生物的方法，其特征在于，步骤S3超高速离心转速设置为44000-46000rpm，离心力为180000-190000g，离心时间为45-50h。

6.根据权利要求1所述的一种鉴定硝化微生物的方法，其特征在于，步骤S3密度层级总层数为16层。

7.根据权利要求1所述的一种鉴定硝化微生物的方法，其特征在于，步骤S4后处理前每个密度层级需要加入PEG6000溶液进行静置处理。

8.根据权利要求1所述的一种鉴定硝化微生物的方法，其特征在于，步骤S4后处理具体为：对每个密度层级进行离心去上清，然后清洗干燥，最后溶解于无核酸水中。

9.根据权利要求1所述的一种鉴定硝化微生物的方法，其特征在于，荧光定量PCR中引物为：AOA引物CamoA 23F/616R、AOB引物amoA1F/2R、comammox clade A引物comA_244F/659R、comammox clade B引物comB_244F/659R。